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豬卵巢顆粒細(xì)胞(永生化)
  • 豬卵巢顆粒細(xì)胞(永生化)
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更新時(shí)間:2025-05-13 14:49:40

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一、豬卵巢顆粒細(xì)胞簡(jiǎn)介:卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素
一、豬卵巢顆粒細(xì)胞簡(jiǎn)介:

卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。人卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞,其增殖與分化直接影響著卵泡的生長(zhǎng)啟動(dòng)、發(fā)育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動(dòng)。
本公司生產(chǎn)的豬卵巢顆粒細(xì)胞采用誘導(dǎo)法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,卵泡刺激素受體(FSHR)免疫熒光染色呈陽性,細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法

1 您收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí), 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液(備注: 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞, 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng),以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡 最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液, PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞貼壁后, 觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)用適當(dāng)量的凍存液(培養(yǎng)液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20 1h,然后將其移入-80℃過夜, 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存)。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,然后加入 5ml 全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞, 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3
第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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