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一、小鼠肺泡巨噬細胞簡介肺泡巨噬細胞由單核細胞分化而來，廣泛分布在肺間質內，在肺泡隔內較多

一、小鼠肺泡巨噬細胞簡介

肺泡巨噬細胞由單核細胞分化而來，廣泛分布在肺間質內，在肺泡隔內較多。肺泡巨噬細胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍，有重要防御功能。吸入空氣中的塵粒、細菌等異物進入肺泡，多被肺泡巨噬細胞吞噬清除，故細胞胞質內常見塵粒、細菌等物進入肺泡，多被肺泡巨噬細胞吞噬清除，故細胞胞質內常見塵粒、次級溶酶體及吞噬體等。吞噬異物的肺泡巨噬細胞，有的從肺泡腔經呼吸道粘液流動和纖毛運動而被咳出，有的進入肺淋巴管隨淋巴進入肺淋巴結內。
本公司生產的小鼠肺泡巨噬細胞采用體外灌注法制備而來，細胞總量約為5×10⁵/T25方瓶，CD68呈陽性，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

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