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小鼠肺靜脈平滑肌細胞(原代)
  • 小鼠肺靜脈平滑肌細胞(原代)
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更新時間:2025-05-13 14:50:28

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一、小鼠肺靜脈平滑肌細胞簡介 肺靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中,把動脈血由肺送回心臟的靜脈,是一個靜脈里流動脈血的血管

一、小鼠肺靜脈平滑肌細胞簡介

肺靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中,把動脈血由肺送回心臟的靜脈,是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對,共4條,兩條連接右肺,兩條連接左肺。肺大靜脈平滑肌細胞主要功能:(1)所表達的鈣通道表面表達的ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁炎癥反應。(2)是多數重要動脈疾病的靶細胞。(3)保持靜脈管腔的通暢。
本公司生產的小鼠肺大靜脈平滑肌細胞采用酶解法制備而來,細胞總量約為5×105/T25方瓶,α-SMA、Desmin呈陽性,細胞純度可達90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法

1 、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時, 以穩定細胞狀態,然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液(備注: 先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞, 保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長,以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡 ,最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養液, PBS 清洗細胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)棄上清,沉淀細胞用 10ml 培養基重懸,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 胞培養箱中培養;
4)待細胞貼壁后, 觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養液,用 PBS 清洗細胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min;
3)用適當量的凍存液(培養液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20 1h,然后將其移入-80℃過夜, 24h 后轉入液氮中進行長期儲存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存)。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 ,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,然后加入 5ml 全培養液混勻細胞, 將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細胞培養箱中培養;
3
第二天,換用新鮮培養基繼續培養。

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