一、小鼠神經干細胞（原代）簡介：

神經干細胞是多能干細胞，可以分化為神經系統的多種細胞，包括神經元、星形膠質細胞、少突膠質細胞等等。神經干細胞可以從哺乳動物大腦的不同區域和脊髓等神經系統中分離出來。神經干細胞有重建神經環路的能力，因此具有治療腦組織損傷的潛能，從而在研究神經退行性疾病動物模型、遺傳性中樞神經系統疾病、中風和脊髓損傷等方面有著廣泛的研究。  

本公司生產的小鼠神經干細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。  

二、小鼠神經干細胞（原代）使用方法：  

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置2-3小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡），最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。  

2、細胞傳代：  

1細胞生長至覆蓋培養瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養瓶中37度培養箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3棄上清，沉淀細胞用10ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；  

4待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。  

3、細胞凍存：  

1細胞生長至覆蓋培養瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養瓶中37度培養箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3用適當量的凍存液（培養液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；  

4先將細胞凍存管放置于-20℃1h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。  

4、細胞復蘇：  

1從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；  

2將凍存管中的細胞轉移至含5ml培養液無菌離心管中，1000rpm離心5min，然后加入5ml培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至T25培養瓶中，放置于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；  

3第二天，換用新鮮培養基繼續培養。