成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
上海語純生物科技有限公司>技術文章>穩定細胞株構建

技術文章

穩定細胞株構建

閱讀:1172          發布時間:2021-3-1

穩轉細胞系(穩定表達細胞株)指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上,使細胞長期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后,通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經細胞克隆挑選得到的,由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統一,傳代過程中細胞的基因表達保持穩定。

       用轉染質粒或病毒侵染的方法將構建好的含靶基因的載體導入細胞,根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎上,得到單細胞長出的陽性單克隆,繼而得到穩定轉染細胞株。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。

       篩選穩定細胞株的兩種方法
       1、轉染質粒后,單克隆方法篩選穩定細胞系
       對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過表達,如果轉染效率達到40%,基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗,對轉染效率要求遠遠高于基因過表達,通常質粒轉染無法滿足。
       另外,質粒游離于細胞質中,很快降解,無法滿足較長時間的檢測項目;質粒轉染整合幾率極低,穩定細胞株構建耗時耗力,且得率很低,往往需要挑取單克隆株。
       2、病毒感染篩選穩定細胞株
       病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株,由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣,感染效率高,且與細胞染色體整合而不發生基因重排,是制備穩定細胞株的理想載體。
       穩定轉染細胞株服務流程
      1、載體構建:將外源基因構建到合適的載體上,如需病毒轉染,則包裝病毒。
      2、篩選濃度測定:以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
      3、細胞接種:轉染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞應達到 60%-80% 覆蓋。
      4、細胞轉染:用構建好的載體(或包裝好的病毒)轉染目的細胞。
      5、抗生素篩選。
      6、鑒定篩選結果。
     終交付
     1、病毒滴度檢測報告;穩轉細胞株;
     2、結題報告,包括詳細的實驗流程,測序結果和峰圖、引物序列、載體圖譜和滴度測定報告和q-P

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

對比框

產品對比 產品對比 聯系電話 二維碼 意見反饋

掃一掃訪問手機商鋪
在線留言
主站蜘蛛池模板: 欧美日韩国产成人一区二区| 免费看午夜高清性色生活片| 精品国产高清免费在线观看| 国内精品久久久久久久影视| 男人av天堂资源| 精品久久久久久中文| 欧美日韩在线8866| 国产av综合精品色区| 91福利在线免费播放| 国产精品99精品无码视亚| 国产亚洲欧美精品一区二区| 午夜成年奭片免费观看| 国产欧美精品一区二区三区三| 神马影院我不卡手机版| 人人干人人爽| 国产区第一页| 国产真实乱人偷精品人妻69| 日本无码毛片久久久九色综合| 国产欧美日韩综合精品一区| 日韩午夜理论电影在线观看| 亚洲欧美中文字幕一区二区| 久久九九少妇免费看A片| 国产亚洲欧洲一区二区| 国产真实女人一级毛片| 国产专区视频在线观看| 我的下面被三个男人玩肿了| 亚洲欧美日韩一级片| 吃瓜网51爆料呱呱| 久久se视频精品视频在线| 午夜亚洲动漫精品AV网站| 国产三级日韩欧美| 歪歪漫画-韩漫首页免费观看| 国产又粗又长又大精品A片| 宅女午夜福利免费视频| 亚洲欧美国产精品18p| 久久国产精品久久国产精品| 国产精品丝袜久久久久久不卡| 欧美日韩国产免费看| 欧美国产激情二区三区-免费A片| 激情亚洲欧美日韩| A片人人澡C片人人人妻付费|