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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
衣氏放線菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
衣氏放線菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Actinomyces israelii |
貨號(hào) | CP933859 |
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br/>探針完整時(shí)，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是衣氏放線菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
氨力農(nóng)相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA Kit，48T/96T
氨力農(nóng)相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品人單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA Kit，48T/96T
阿那曲唑標(biāo)準(zhǔn)品小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA Kit，48T/96T
阿那曲唑相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA Kit，48T/96T
穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品人單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit，48T/96T
穿心蓮提取物標(biāo)準(zhǔn)品小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit，48T/96T
醋酸阿奈可他標(biāo)準(zhǔn)品大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit，48T/96T
醋酸阿奈可他相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit，48T/96T
茴香腦標(biāo)準(zhǔn)品小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit，48T/96T
1,6-脫水吡喃葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA Kit，48T/96T
阿尼利定標(biāo)準(zhǔn)品人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit，48T/96T
茴香醚標(biāo)準(zhǔn)品小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit，48T/96T
酸安他唑啉標(biāo)準(zhǔn)品大鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA Kit，48T/96T
地蒽酚標(biāo)準(zhǔn)品人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit，48T/96T
衣氏放線菌探針?lè)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒安替比林標(biāo)準(zhǔn)品小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit，48T/96T HAX1 造血干細(xì)胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體荷葉堿
HAVCR1/TIM1 腎損傷分子1抗體（型肝炎病細(xì)胞受體1）鷹嘴豆芽素A
HAUSP/USP7 皰疹病相關(guān)泛素特異性蛋白酶7抗體10-羥基喜樹(shù)堿
HAUS4/C14orf94 14號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框94抗體可可堿
HAS3 透明質(zhì)酸合成酶3抗體D-松醇
HAS1/Hyaluronan synthase 1 透明質(zhì)酸合成酶1抗體常春藤皂苷元
HARS 組氨酸t(yī)RNA連接酶抗體白花前胡醇
Haptoglobulin beta 結(jié)合球蛋白β抗體佛手柑內(nèi)酯
HAPLN2 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體左旋肉堿
HAND2 心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白2抗體矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷
HAND1 心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體化矢車(chē)菊素
Hamartin/TSC1 結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體5-羥色胺酸
Hairless 無(wú)毛發(fā)蛋白抗體亥茅酚苷
HAI-1 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物抑制抗體異鼠李素-3-O-新橙皮苷
HAGHL 羥基酰谷胱甘肽水解酶樣蛋白抗體紫蓳靈