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Southern blot(非放射性標記)

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更新時間:2020-05-14 13:53:42瀏覽次數:1776次

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Southern blot 是檢測DNA樣品中是否含有目的DNA的片段的技術。將凝膠電泳分離得到的DNA的片段轉移到膜上,并采用探針雜交法檢測目的DNA的存在。在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。

Southern blot 是檢測DNA樣品中是否含有目的DNA的片段的技術。將凝膠電泳分離得到的DNA的片段轉移到膜上,并采用探針雜交法檢測目的DNA的存在。在遺傳病診斷、DNA的圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。

 

Southern印跡雜交技術包括兩個主要過程:一是將待測定核酸分子通過一定的方法轉移并結合到一定的固相支持物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);二是固定于膜上的核酸與同位素標記的探針在一定的溫度和離子強度下退火,即分子雜交過程。

 

操作流程如下:

1.        限制性酶切將DNA切割成小片段

2.        電泳法分離DNA的片段。

3.        將DNA從凝膠轉移到硝酸纖維膜或PVDF上

4.        確認DNA轉移是否*

5.        UV法將DNA固定到膜上

6.        探針的非放射性標記(生物素酰化法)

7.        進行探針和膜的雜交

8.        根據標記的探針的特性,進行探針檢測和對結果的分析

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