脂肪組織油紅O染色實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案

?一、實(shí)驗(yàn)原理?

• ?染色機(jī)制?：油紅O作為脂溶性染料，通過(guò)物理吸附作用與中性脂肪（甘油三酯、脂蛋白等）特異性結(jié)合，使脂滴呈現(xiàn)鮮紅色
  

• ?應(yīng)用場(chǎng)景?：用于脂肪變性、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊脂質(zhì)沉積及脂肪源性腫瘤的鑒別診斷

?二、實(shí)驗(yàn)流程?

1. ?樣本制備?

• ?固定?：新鮮脂肪組織需4%多聚甲醛固定24小時(shí)（避免凍結(jié)）

• ?切片?：冰凍切片厚度6-10 μm，直接貼片或10%福爾馬林短暫固定

2. ?染色步驟?

• ?預(yù)處理?：70%乙醇浸洗20-30秒（減少背景染色）

• ?染色?：油紅O染液（50%乙醇配制）避光染色10-15分鐘

• ?分化?：60%異丙醇分色至間質(zhì)無(wú)色（鏡下控制）

• ?復(fù)染?：蘇木素染核1-2分鐘，流水返藍(lán)

3. ?封片觀察?

• 甘油明膠封片，避免氣泡（切片微濕時(shí)操作）

• 顯微鏡下脂滴呈紅色，細(xì)胞核藍(lán)色

?三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?

• ?染色液飽和性?：染液需現(xiàn)配現(xiàn)用，未飽和易致沉淀

• ?分化控制?：過(guò)度分化會(huì)導(dǎo)致脂滴著色變淺

• ?特殊樣本?：

• 動(dòng)脈粥樣硬化組織需延長(zhǎng)染色至20分鐘

• 脂肪肝樣本建議增加連續(xù)切片數(shù)量

?四、結(jié)果示例?

• ?正常脂肪細(xì)胞?：胞內(nèi)充滿均勻紅色脂滴

• ?病理變化?：

• 脂肪變性：肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)散在紅色脂滴

• 脂肪栓塞：血管腔內(nèi)可見(jiàn)紅色脂滴團(tuán)塊