流式細(xì)胞術(shù)是一種重要的細(xì)胞分析技術(shù)，可以用于細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞表型分析和細(xì)胞排序等。在進行流式細(xì)胞術(shù)之前，進行質(zhì)量控制是非常重要的，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。本文將詳細(xì)介紹流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制方法。

1. 流體系統(tǒng)校準(zhǔn)

流體系統(tǒng)包括流量計和壓力傳感器。首先，通過測量實際流速和壓力來校準(zhǔn)流量計和壓力傳感器。將標(biāo)準(zhǔn)流體注入流量計，測量流速并校準(zhǔn)。將標(biāo)準(zhǔn)壓力注入壓力傳感器并測量輸出值，然后校準(zhǔn)。

2. 激光系統(tǒng)校準(zhǔn)

校準(zhǔn)激光系統(tǒng)旨在確定激光束位置，以便在樣本容器中獲得正確的光學(xué)讀數(shù)。使用校準(zhǔn)珠固定在流式細(xì)胞儀樣本管中，使用激光照射校準(zhǔn)珠并確定激光束位置。

3. 光學(xué)系統(tǒng)校準(zhǔn)

校準(zhǔn)光學(xué)系統(tǒng)是確保樣本分析時光學(xué)讀數(shù)準(zhǔn)確的關(guān)鍵。校準(zhǔn)光學(xué)系統(tǒng)包括檢測器和同步器。檢測器負(fù)責(zé)測量樣品中免疫染色顆粒的數(shù)量和大小。同步器負(fù)責(zé)確保檢測器測量樣品時以正確的頻率進行測量。

4. 標(biāo)準(zhǔn)顆粒校準(zhǔn)

流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)的最后一個步驟是使用標(biāo)準(zhǔn)微粒校準(zhǔn)儀對樣本進行標(biāo)準(zhǔn)化。使用寬敞的樣品管，在不同的濃度下測試標(biāo)準(zhǔn)微粒。校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線后，流式細(xì)胞儀可以精確地計算樣品中特定免疫染色顆粒的數(shù)目和特征。

流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)

1.清潔流式細(xì)胞儀的樣品室，并檢查激光器和光路系統(tǒng)是否正常工作。

2.使用粒子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢查細(xì)胞儀的散射、熒光和時間參數(shù)的準(zhǔn)確性。

3.清洗和校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀的液體系統(tǒng)，確保流速和樣本量的準(zhǔn)確控制。

流式細(xì)胞儀性能的質(zhì)量控制

a.定期檢查流式細(xì)胞儀的性能參數(shù)，包括散射靈敏度、熒光檢測靈敏度和時間分辨率。

b.使用校準(zhǔn)顆粒檢驗流速的準(zhǔn)確性和一致性，

c.根據(jù)實驗需要，使用合適的質(zhì)檢顆粒進行分辨率和強度的調(diào)

樣品準(zhǔn)備

1.均勻懸浮細(xì)胞樣本，避免細(xì)胞團聚和沉積。可通過離心和重新懸浮樣本來實現(xiàn)。

2.使用質(zhì)量可靠的細(xì)胞染色方法，確保染色的準(zhǔn)確性和一致性。

3.調(diào)整樣本的濃度，以避免過度聚焦和細(xì)胞過于稀疏而損失信號。

樣本純度的質(zhì)量控制

a.使用合適的負(fù)對照和正對照來評估染色的純度。例如，使用未染色細(xì)胞作為負(fù)對照，使用己知陽性標(biāo)記的細(xì)胞作為正對照

b.定期檢查染色結(jié)果的一致性，確保負(fù)對照細(xì)胞沒有陽性標(biāo)記正對照細(xì)胞有預(yù)期的陽性標(biāo)記

CytoFLEX即用型日常QC質(zhì)控?zé)晒馕⑶騼x器校準(zhǔn)品中文介紹

CytoFLEX即用型每日QC熒光微球是3μm熒光微球的懸浮液，可用于流式細(xì)胞儀光學(xué)對準(zhǔn)和液流系統(tǒng)的日常驗證。該產(chǎn)品以預(yù)稀釋的即用型形式提供，在以下波長下激發(fā)時，熒光發(fā)射波長在355nm至800nm 之間：355nm、375nm、405nm、488nm、561nm和638nm。將混合物懸浮在含有表面活性劑和穩(wěn)定劑的水介質(zhì)中。C65719取代了 CytoFLEX 日常QC熒光球 B53230，適用于CytoFLEX 細(xì)胞儀平臺。

CytoFLEX即用型日常QC質(zhì)控?zé)晒馕⑶騼x器校準(zhǔn)品英文介紹

CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres is a suspension of 3 µm fluorescent microspheres, which may be used for daily verification of the flow cytometer's optical alignment and fluidics system. This product is provided in a pre-diluted, ready-to-use format, with a fluorescence emission between 355 nm to 800 nm when excited at: 355 nm, 375 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, and 638 nm. The mixture is suspended in an aqueous medium containing surfactants and stabilizers. Click here for CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres Instructions for Use. This product replaces the CytoFLEX Daily QC Fluorospheres, B53230, and should be used with the CytoFLEX cytometer platform.

CytoFLEX即用型日常QC質(zhì)控?zé)晒馕⑶騼x器校準(zhǔn)品操作流程

1. Use the filter set recommended by the manufacturer for detecting the appropriate fluorescence parameters (refer to the CytoFLEX Platform IFU).

2. Ensure that the target value file for the specific lot of CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres has been loaded into the flow cytometer software. Refer to your CytoFLEX Platform IFU for instructions on importing your lot-specific target value file.

3. Vigorously mix the CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres vial using a vortex mixer for 2-3 seconds.

4. Add:

4. 10 drops of fluorospheres to a tube if using Semi Automatic (tube) Sample Injection Mode.

b. 3-4 drops of fluorospheres to a well for either Standard 96-well plate or Deep-well plate for the plate loader injection mode.

5. Run the Quality Control (QC) protocol per the instructions in your CytoFLEX Platform (IFU).

CytoFLEX即用型日常QC質(zhì)控?zé)晒馕⑶騼x器校準(zhǔn)品注意事項

1. 產(chǎn)品為即用型產(chǎn)品，無需額外配制,直接使用。

2. 如果分裝，密封好，5天內(nèi)用完。

3. 熒光微球長時間靜置，會自然沉降。確保在使用前將熒光球充分重懸搖勻。

4. 請勿使用超過樣品瓶標(biāo)簽上有效期的熒光球。

5. 產(chǎn)品冷藏勿凍。

6. 處理此試劑時，請使用良好實驗室規(guī)范 （GLP）。

7. 本試劑含有防腐劑，如果發(fā)生皮膚或眼睛接觸，請用水及時深度清洗。

流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)報告的目的是記錄所有流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)過程的詳細(xì)信息。報告應(yīng)包括以下信息：

1. 日期和時間

2. 流體系統(tǒng)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)

3. 激光系統(tǒng)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)

4. 光學(xué)系統(tǒng)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)

5. 標(biāo)準(zhǔn)微粒校準(zhǔn)數(shù)據(jù)

6. 校準(zhǔn)珠校準(zhǔn)數(shù)據(jù)

7. 校準(zhǔn)過程中發(fā)現(xiàn)的任何問題或異常情況

8. 執(zhí)行校準(zhǔn)的技術(shù)人員的姓名和簽名