目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>其他試劑>> M3155.0200用于 qPCR 的 ProbeMasterMix FAST High ROX
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | M3155.0200 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
（ProbeMasterMix FAST High ROX für die qPCR）
包括 500 nM ROX，用于基于探針的 qPCR
高熱穩定性、熒光和靈敏度
變性時間短，最長 2 分鐘
優化 2 步法 PCR 方案
熱啟動技術可防止引物二聚體形成，無需在冰上移液，也無需立即進一步處理
含 500 nM ROX 的 ProbeMasterMix FAST，用于所有常見模塊系統中的實時熒光定量 PCR。該預混液設計用于快速 PCR，變性時間短，采用兩步法 PCR 方案。
Genaxxon ProbeMasterMix 中使用的熱啟動 Taq 聚合酶的優勢：
用于室溫構建的熱啟動技術
初始變性時間短，為 2 分鐘或更短
針對 2 步法 PCR 方案進行了優化
無需在冰上移液
無需立即進一步處理 （PCR）。移液式 PCR 方法可以在 RT 中放置長達 3 天。
擴增富含 GC 的模板
高產
無引物二聚體形成
Genaxxon 熱啟動 Taq DNA 聚合酶具有便利性和實用性，可實現一致的效率和特異性：
1。它在低溫下抑制聚合酶，從而可靠地防止非特異性 PCR 反應。因此，PCR 設置不必在冰上進行。
2. 這意味著 PCR 方法可以在 RT（20°C 至 25°C）下混合并儲存長達 3 天，而不會影響最終結果（例如，在午休期間或等待更多樣品時）。
含 500 nM ROX 的 Probe qPCR Mastermix FAST 包含進行定量 PCR 所需的所有組分，且數量經過優化。
熱啟動 Taq DNA 聚合酶
dATP、dCTP、dGTP、dTTP
優化的反應緩沖液
500 nM ROX 作為標準內部染料
穩定劑和增強劑，可實現低拷貝數靶標的擴增
1 mL 的小等分試樣簡化了處理和儲存（每個等分試樣的凍融循環次數更少）。
特別適用于：Applied Biosystems® 5700、7000、7300、7700、7900、7900 HT、Eppendorf Realplex4、StepOne™ 和 StepOnePlus™。
規格：
該 ProbeMastermix 是一種即用型 2 次預混液，含有 500 nM ROX™
初始變性時間
短，針對 2 步法 qPCR
優化，等分試樣大小：1 mL。
PCR 引物延伸 多重 PCR 低拷貝靶標 PCR 實時熒光定量 PCR
One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.
eclass-Nr: 32-16-05-02
技巧
快速 PCR：
在進行快速實時熒光定量 PCR 時，考慮引物設計和靶標大小非常重要。為了在快速循環條件下進行高效擴增，建議靶標大小在 70 bp 至 200 bp 之間。目標長度越短，總運行時間越快。對于其他靶標和其他引物組，必須通過實驗確定退火步驟。
請使用以下方案作為靈感，因為您需要根據您的目標大小和應用的儀器優化儀器設置。
在 LightCycler® 96 上使用 Genaxxon 預混液（不含 ROX）快速獲得實時 PCR 結果
使用 LighCycler96 （Roche） 使用快速循環實時 2 步方案對不含 ROX 的 GreenMasterMix （2X） 或不含 ROX 的 ProbeMasterMix （2X） 進行了測試;分別為快速 PAH12 Green LC 和快速 Pthr 探針 LC。
qPCR 設置：使用 GreenMasterMix （2X）（不含 ROX）或 ProbeMasterMix （2X）（不含 ROX），靶向 PAH12 （203 bp） 或 Pthr （75 bp） 的引物和 4 種濃度的 gDNA（40 ng、20 ng、10 ng 和 5 ng）。所有 DNA 濃度均以四次重復測試。見圖 1 和圖 2。PCR 反應混合物在 LightCycler® 96 上運行（對 ROX 無要求）。所應用快速方案的儀器設置、運行時間和質量標準;將 Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr 探針 LC 與標準方案進行比較;標準 Pthr LC。見表 1.結果
：標準 Fast Pthr 探針 LC 方案的運行時間為 80.8 分鐘。快速 PAH12 綠色液相色譜和快速 Pthr 探針液相色譜方案的運行時間分別為 47.5 和 40.8 分鐘。所有協議時間均包括 samping 時間和 15 分鐘熱啟動。如表 1 所示，Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr Probe LC 方案的確定標準令人滿意。此外，使用不含 ROX 的 Green 2x 預混液和快速 PAH12 Green 液相色譜方案進行的熔解曲線分析證實了高特異性。
在 -20°C 下儲存。 僅供實驗室使用！
上海牧榮生物科技有限公司 是一家專注于分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳學、免疫學、生物化學、蛋白質學、細胞治療、臨床應用等領域，以銷售為主的生物技術公司。銷售的產品涉及，細胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細胞因子、技術服務、實驗耗材和消耗品、儀器設備等。客戶遍布大學、研究所、醫院、衛生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位。
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