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血清實驗方法原理
實驗方法原理
不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長。檢測不同批次的血淸，然后大批量購買血清不僅能節(jié)約經(jīng)費且能減少實驗條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長的化合物。
不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長。檢測不同批次的血淸，然后大批量購買血清不僅能節(jié)約經(jīng)費且能減少實驗條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長的化合物。
實驗步驟
1) 從不同生產(chǎn)廠商得到 100ml 的批次的試驗血清。
2) 用本實驗室常用的 2~3 種細胞來檢測血清。
3) 將 lml 含有 20% 的上述待檢血清的培養(yǎng)液加于 9 個培養(yǎng)皿中（35-mm), 每種批次的血清用 9 碟細胞培養(yǎng)皿進行檢測。
4)9 碟中每 3 碟接種入 500、1000、2000 個細胞。如果細胞存活率較高，細胞數(shù)可降低。細胞不必長滿，但應長到形成足夠密度的單個克隆。細胞應在不含血清的培養(yǎng)液屮稀釋，以免殘留血淸遺留在現(xiàn)有的培養(yǎng)液中。細胞應加至體積為 1 ml 以便血清終濃度為 10%。現(xiàn)用的血清作為該方案的內(nèi)標。
5) 配制 80 ml 含待檢血清濃度為 10% 的培養(yǎng)液。用該培養(yǎng)液每周給細胞換液兩次，共兩周。克隆在此期間應較明顯。
6) 進行克隆染色，比較不同批次血清的克隆數(shù)。克隆的染色用 1xPBS 漂洗，瀝干 PBS 后，加人 2 ml 的 Wright 染液（Fisher Scientific)，室濕染色 8 分鐘后，加人 2 ml 水, 室溫放置 10 分鐘后用水漂洗，觀察克隆的數(shù)量和大小。