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螢光素酶技術在小分子藥物篩選研究中的應用

2024-3-1  閱讀(220)

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一,藥物研發關鍵點



二,理想的藥物靶標篩選模型

1)高靈敏度

2)寬的線性范圍

3)穩定且可重復

4)操作簡單

5)可進行高通量篩選

三,高靈敏度發光檢測技術:螢光素酶檢測技術

熒光與化學發光的比較

由于熒光需要光激發后才能發出光,因此必須有一種方法可以區分輸入光和輸出光,需要濾光片將某些波長的光過濾掉,只讓發射光的波長通過。然而,沒有任何濾光片是的,總有一定量的激發光會透過濾光片,因此就增加了背景噪聲。

生物化學發光過程不需要外部光源,均從發光過程中產生。這意味著沒有背景光。因此,產生的光與測得的光之間存在很強的線性相關性,其線性范圍遠大于熒光:發光過程為7~8個數量級,而熒光過程僅為3~4個數量級。

螢光素酶:是自然界中能夠產生生物發光的酶的統稱。

1. 具有酶活性(信號放大能力)

2. 蛋白小

3. 沒有內源性表達,背景低

4. 易于定量

5. 高靈敏度、線性范圍寬

6. 反應迅速

7. 可實現雙螢光素酶報告基因檢測




四,螢光素酶技術應用于藥物靶標篩選



基于螢光素酶的應用,開發藥物靶標篩選產品:

1)檢測螢光素酶水平的變化;

2)檢測ATP,例如:

• RealTime-GloTM Extracellular ATP 檢測

• GTPase-GloTM檢測

• ENLITEN® ATP 檢測

• 激酶活性檢測

• 細胞/細菌活力檢測

• cAMP

• Pgp糖蛋白檢測

3)檢測修飾的螢光素底物,例如:

• Caspase 3/7活性檢測

逐典螢光素酶報告基因檢測試劑盒

逐典螢光素酶報告基因檢測試劑盒旨在準確、靈敏、高效地測定螢火蟲螢光素酶活性,應用高通量藥物篩選、藥物活性檢測、大規模啟動子功能測定、信號通路等研究。

目前,最常使用的螢光素酶主要包括 Firefly luciferase 和 Renilla luciferase,針對報告基因檢測不同的側重需求,逐典推出了3種檢測系統。








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