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單克隆培養(yǎng)的原理介紹
閱讀：2929 發(fā)布時(shí)間：2020-7-20
單克隆培養(yǎng)對(duì)增殖力比較強(qiáng)的細(xì)胞操作起來(lái)的確比較適合，但增殖較慢的細(xì)胞也不是不可以，至于稀釋到每孔只有1~2細(xì)胞，細(xì)胞稀釋的密度要取決你每孔所加的培養(yǎng)液體積，一般說(shuō)來(lái)保證每孔內(nèi)平均細(xì)胞數(shù)為0.5個(gè)即可，稀釋并加入培養(yǎng)孔后，在顯微鏡下觀察，將只有一個(gè)細(xì)胞的孔標(biāo)記出。
經(jīng)過(guò)抗體測(cè)定的陽(yáng)性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行克隆，以得到單個(gè)細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體，克隆的時(shí)間一般說(shuō)來(lái)越早越好，因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng)，互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒(méi)和淘汰的可能，但克隆時(shí)間也不宜太早，太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一段時(shí)期培養(yǎng)之后，也還會(huì)因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)。
單克隆培養(yǎng)原理：將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個(gè)細(xì)胞的線形液滴，熒光素發(fā)射熒光，此信號(hào)由光電倍增管接收，再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號(hào)，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號(hào)并與預(yù)定的信號(hào)對(duì)比，根據(jù)細(xì)胞熒光強(qiáng)度及細(xì)胞大小不同，將細(xì)胞分成不同級(jí)別，在電場(chǎng)中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。