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細胞株復活的步驟
細胞株的復蘇是細胞培養過程中的重要環節：
一、前期準備
1. 人員與環境準備
- 細胞株復蘇前，需確保操作人員具備相關的專業知識和技能，熟悉細胞株的特性及復蘇流程。操作人員應穿戴好實驗服、手套等防護裝備，做好個人防護。
- 細胞培養室應保持清潔、無菌，提前用紫外線燈照射或甲醛熏蒸等方式對操作臺面、空氣等進行消毒處理。同時，要調節好培養室的溫度和濕度，一般溫度保持在37℃左右，相對濕度在95%以上，以提供適宜的細胞生長環境。
2. 器材與試劑準備
- 準備好細胞培養瓶或培養皿、移液管、離心管、吸管、酒精燈、鑷子等實驗器材，并確保其均已經過嚴格的滅菌處理。
- 配置好相應的培養基，根據細胞株的種類選擇合適的培養基類型和配方，加入血清、抗生素等必要的添加劑。將培養基預熱至37℃，以提高細胞復蘇后的適應能力。同時，準備好胰蛋白酶等消化液，以便后續對細胞進行傳代培養。
二、復蘇操作步驟
1. 取出凍存細胞株
- 從液氮罐中小心取出含有細胞株的凍存管，注意避免凍傷。檢查凍存管是否有裂縫或破損，如有則不能使用。
2. 快速解凍
- 迅速將凍存管放入37℃的水浴中，輕輕搖晃，使凍存液盡快融化。注意不要讓水進入凍存管內，以免污染細胞。一般來說，在1-2分鐘內使凍存液融化即可。
3. 轉移細胞
- 用酒精棉球擦拭凍存管外壁，然后在超凈工作臺中打開凍存管。用吸管將融化的細胞懸液轉移到預先準備好的含有適量培養基的離心管中，輕輕吹打混勻。
4. 離心洗滌
- 將離心管放入離心機中，按照適當的轉速(一般為800-1000轉/分鐘)離心3-5分鐘，去除上清液中的凍存液成分，以減少其對細胞的損傷。然后加入適量的培養基重懸細胞，再次離心洗滌，重復2-3次。
5. 接種培養
- 將洗滌后的細胞沉淀用適量的培養基重懸，制成單細胞懸液。然后根據細胞株的生長特性和實驗需求，將細胞懸液接種到培養瓶或培養皿中，放入培養箱中培養。
6. 觀察與記錄
- 在細胞復蘇后的最初幾個小時內，要密切觀察細胞的形態、貼壁情況等，判斷細胞是否復蘇成功。同時，記錄細胞的生長狀態、換液時間、傳代時間等信息，以便后續對細胞株的培養和管理。
三、注意事項
1.細胞復蘇過程應盡量快速完成，減少細胞在體外暴露的時間，以提高細胞的存活率。
2. 嚴格遵循無菌操作原則，避免細菌、真菌等微生物的污染。
3. 不同類型的細胞株可能具有不同的生長特性和復蘇要求，因此在復蘇前應充分了解細胞株的相關信息，并根據實際情況調整復蘇方法和條件。