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?生物制品生產和檢驗用牛血清質量標準
用于生物制品生產和檢驗的新生牛血清為從出生 14 小時內未進食初乳的新生小牛采血，分離血清，經濾過除菌制成；胎牛血清為經心臟采集 230～240 日齡的胎牛全血，分離血清，經濾過除菌制成。主要用于細胞培養。【性狀】 澄清稍黏稠的液體，無溶血或異物，凍融后可能存在少量絮狀沉淀。【無菌檢驗】 按附錄 3306 進行檢驗，應無菌生長。【支原體檢驗】 按附錄 3308 進行檢驗，應無支原體生長。【外源病毒檢驗】 取被檢血清樣品 10 ml，3000 r/min 離心 10 分鐘，取上清液，按附錄 3305進行檢驗，應無外源病毒污染。【特異性抗體測定】 根據血清的用途確定測定的抗體種類，采用血清學方法進行檢驗，應符合規定。【細菌內毒素測定】 按《中國獸藥典》一部附錄進行檢驗，每毫升血清的內毒素含量應低于10 EU。【細胞增殖試驗】 下列方法，任擇其一。
（一）SP2/0 增殖試驗法。取生長良好的 Sp2/0 小鼠骨髓瘤細胞，棄營養液，用無血清 MEM 配成每毫升 30 萬～50 萬細胞懸液，計數細胞后，用無血清 MEM 在 96 孔細胞板上作 1:200、1:400、1:800、1:1600 稀釋，每稀釋度加 8 孔，每孔 0.1 ml，每孔再分別補加 0.1ml 含 20%參考血清或 20%被檢血清 MEM 營養液，置 5％CO2 培養箱 37℃培養至 48 小時，倒置顯微鏡下計數，取每孔克隆數均在 30～50 之間的稀釋度的 8 個孔，求和計為總克隆數。計算被檢血清和參考血清的絕對克隆形成率和相對克隆形成率。絕對克隆形成率 ＝該稀釋度形成的細胞克隆總數×100%該稀釋度接種 Sp2/0 懸液細胞總數相對克隆形成率 ＝胎牛血清（或新生牛血清）的絕對克隆形成率×100%參考血清的絕對克隆形成率判定標準：參考血清的絕對克隆形成率應不低于 20% 胎牛血清的相對克隆形成率應不低于 80% 新生牛血清相對克隆形成率應不低于 50%
（二）Vero 細胞增殖試驗法。將已長成良好單層 Vero 細胞按常規傳代方法，用 0.25%胰酶消化分散制備成懸液，1000～1500rpm，離心 10min，棄去上清。將細胞沉淀用含 10%待檢血清的 MEM 細胞培養液重懸，計數后配制成 104個細胞/ml 的細胞懸液。接種 25cm2細胞瓶 2 個，每瓶接種 10mL。將細胞置于 37℃生化培養箱中連續培養 48h 后，分別消化分散，1000～1500rpm，離心 10min，棄去上清，每瓶細胞沉淀分別用 1mL 無血清的 MEM 吹散混勻，進行計數，計算 2 瓶細胞數的算術平均數作為該細胞的細胞數。新生牛血清培養的細胞增殖數應不低于 3.0×104個細胞/ml，胎牛血清培養的細胞增殖數應不低于 5.0×104個細胞/ml