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杭州仟諾生物科技有限公司>>技術文章>>細胞計數與存活測試實驗介紹

細胞計數與存活測試實驗介紹

閱讀:1517        發布時間:2019/11/21
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實驗材料

    0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061) 

    Erythosin bluish stain 
     
    取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl paraben (Sigma H-3647) 溶于100 ml Ca /Mg free saline 

    血球計數盤及蓋玻片(Hemocytometer and coverslip)

    計數器(counter)

    低倍倒立顯微鏡

     粒子計數器(Coulter counter, Coulter Electronics)

實驗步驟

1 取50ml 細胞懸浮液與50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等體積混合均勻于1.5ml 小離心管中。

2 取少許混合液(約15ml) 自血球計數盤chamber 上方凹槽加入,蓋上蓋玻片,于100 倍倒立顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞則為藍色(或紅色- Erythrosin bluish)。

3 計數四個大方格之細胞總數,再除4,乘以稀釋倍數(至少乘以2,因與trypan blue等體積混合),后乘104 ,即為每ml 中細胞懸浮液之細胞數。若細胞位于線上,只計上線與右線之細胞(或計下線與左線之細胞)。
              
4 大格*細胞總數x 2 x 104 / 4= 細胞數/ml*每一大格的體積= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml

4 若不用血球計數盤,可用Coulter counter 作自動計數,惟無法辨別死細胞或活細胞。

5 范例:T75 monolayer culture 制成10ml 細胞懸浮液,取0.1 ml 溶液與0.1ml trypan blue 混合均勻于試管中,取少許混合液加入血球計數盤,計數四大方格內之細胞數目。

    活細胞數/方格:55 ,62, 49, 59
    死細胞數/方格:5, 3, 4, 6
    細胞總數= 243
    平均細胞數/方格= 60.75
    稀釋倍數= 2
    細胞數/ml:60.75 x 104 x 2 = 1.22 x 106
    細胞數/flask: 1.22 x 106 x 10ml = 12.2 x 106
    存活率:225/243﹦92.6 %

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