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杭州仟諾生物科技有限公司>>技術文章>>人正常膀胱上皮細胞 SV-HUC-1 說明書

人正常膀胱上皮細胞 SV-HUC-1 說明書

閱讀:2718        發布時間:2019/10/8
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人正常膀胱上皮細胞(SV-HUC-1)

 

細胞介紹

 

這株細胞是正常輸尿管組織用SV40病毒轉染建株的。反復用非洲綠猴腎細胞平 板測試檢測傳染性SV40的生成,結果都呈陰性。

 

細胞特性

 

1)來源:膀胱

2)形態:上皮細胞

3)含量:>lxl06 個/mL

4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規格:T25瓶或者lmL凍存管包裝

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后, 可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦 使用的培養基后轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養,傳代達到細胞生長 狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

 

細胞培養步驟

 

1)培養基及培養凍存條件準備:

 

1.準備 F-12K 培養基(GIBCO,21127-022),90%;胎牛血清,10%。

2.培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱 濕度為70%-80%。

3. 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

 

2)細胞處理:

 

復蘇細胞:將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補 加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將 細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢 查細胞密度。

細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37°C培

養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止 消化。

按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分 鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養液后吹勻。

將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者

細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄 去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養基后 加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進行凍存。

 

注意事項:

 

收到細胞后,若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立 即與我們聯系。

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注 意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

瓶中。

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