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血清的選擇應注意那些事項

閱讀:1688        發布時間:2019/8/23
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1、胎牛血清的選擇

市場上的胎牛血清種類繁多,魚龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細胞培養的人,難以分辨血清質量的優劣。根據鄙人十多年來血清生產銷售的經驗來看

一、外觀

拿到血清,zui先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養經驗的人來說,外觀的判斷尤為重要

1、顏色

根據血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現出黃色或紅色,我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

國產血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現出明亮的蠟黃色,當然,國產血清也很少有標準意義上的胎牛血清。

進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。

總的來說,國產的血清呈現出蠟黃。進口的血清,質量的呈現出談黃、微紅色,如Gibco 16000,差點的呈現出橘紅色或鮮紅色。當然,熱滅活血清或保存不當的血清,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現出暗紅,甚至咖啡色。

2、沉淀

很多血清客戶,會發現進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量問題,這是沒有根據的。

血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生,對血清質量沒有任何影響,沉淀的產生原因很多,和廠家的加工生產方式密切相關。

國產的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環境都不好,從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”,很少有沉淀產生。

進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,生產后的成品也是清澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產后血清可能會渾濁,甚至有大量沉淀。

當然,購買回來的血清都是冰凍狀態,使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

3、澄清度

進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低,表現為稀薄、清淡,而國產血清,因為絕大多數是新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深,這對于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進行對比,可容易分辨。

2、胎牛血清使用中的常見問題

1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

長時間儲存在2-8時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20以下儲存血清,并避免反復凍融。

我們建議血清應保存在-2O。若存放于4時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37,沉淀會自然消失。

4、 如何避免血清中產生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產生:

(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

(2) 血清分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20直接至37解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

(4) 勿將血清置于37太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

 

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