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BioProE細胞凍存液(不含蛋白、DMSO和血清)使用方法
BioProE細胞凍存液基于控冰凍存技術,由明確化學成分組成,不含有胎牛血清和動物源成分、DMSO、和其他蛋白質(zhì)類物質(zhì)。自主研發(fā)控冰保護成分能夠使細胞復蘇后存活率達到90%以上。目前已驗證的常用細胞系包括CHO、HEK 293、NS-1、5637、A549、HUH7、HepG2、VERO、MDCK、293T、marc-145、pk-15。也可用于常見原代細胞的冷凍保存。
細胞凍存步驟
1、常規(guī)方法收集對數(shù)生長期且細胞活率大于90%的貼壁細胞或懸浮細胞置于離心管中。
2、根據(jù)培養(yǎng)細胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細胞數(shù)。
3、將離心管放入離心機中以1,000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。離心后吸棄上清液,保留細胞沉淀。
4、加入1-2mL的細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度約為 5×105 -1×107 /ml。輕柔地混勻細胞,制成細胞混合液。
5、分裝于已標記的凍存管中。
6、直接放入-80℃超低溫冰箱中,可保存一年。
7、如果想長期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天時間,方可移至液氮罐中保存。
凍存細胞復蘇步驟
1、從-80℃冰箱或液氮中取出凍存的細胞,立即置于37℃水浴鍋中快速融化。
2、待凍存管中的細胞混合液wan全融化后轉(zhuǎn)移到無菌離心管中,立即加入等體積的細胞wan全培養(yǎng)基與細胞混合,1,000rpm離心5分鐘,移除上清液,收集細胞沉淀。
3、加入適量的wan全培養(yǎng)基,沿著管壁緩緩加入細胞沉淀中,輕柔混勻,將混勻好的細胞移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。
4、鏡檢觀察,待細胞狀態(tài)恢復后可進行其他研究或者培養(yǎng)處理。
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