揭示lncRNA Gm28309在RAW264.7和THP-1巨噬細胞中調控布魯氏菌炎癥反應的ceRNA機制
1. 文章主要研究方向
標題:《Brucella-Induced Downregulation of lncRNA Gm28309 Triggers Macrophages Inflammatory Response Through the miR-3068-5p/NF-κB Pathway》
方向:研究布魯氏菌(Brucella)感染如何通過下調長鏈非編碼RNA(lncRNA Gm28309)激活miR-3068-5p/NF-κB信號通路,從而觸發巨噬細胞的炎癥反應及其分子機制。
2. 2024年影響因子
期刊:Frontiers in Immunology
影響因子:約8.8。
3. ZETA life轉染試劑(AD600150)的應用
轉染細胞及基因:
• RAW264.7細胞(小鼠巨噬細胞系):
? 轉染基因:lncRNA Gm28309過表達質粒(Gm28309-pcDNA3.1)、miR-3068-5p mimic/inhibitor、siRNA靶向p65(NF-κB抑制劑)。
• THP-1細胞(人單核細胞系,經PMA誘導為巨噬細胞):
? 轉染基因:siRNA靶向候選lncRNAs(如P33714、P3852等)。
4. 轉染實驗數據及解讀
具體實驗數據:
1. RAW264.7細胞轉染Gm28309(圖4A, 4D):
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? 結果:過表達Gm28309顯著降低NLRP3炎癥小體蛋白(NLRP3、Pro-caspase-1)和炎性因子(IL-1β、IL-18)的表達(p<0.05)。
? 解讀:ZETA life試劑高效遞送Gm28309質粒,驗證了其對炎癥的負調控作用。
2. THP-1細胞轉染siRNA靶向lncRNAs(圖3A, 3B):
? 結果:敲低P33714(Gm28309人源同源物)增加IL-1β/IL-18分泌,促進布魯氏菌清除(p<0.01)。
? 解讀:試劑成功遞送siRNA,證明lncRNA在炎癥中的關鍵角色。
3. RAW264.7轉染miR-3068-5p mimic(圖5C, 5D):
? 結果:miR-3068-5p過表達降低kB-Ras2(NF-κB抑制因子)的熒光素酶活性,激活炎癥通路。
? 解讀:試劑高效轉染miRNA,揭示ceRNA調控機制。
ZETA life試劑的貢獻:
• 高轉染效率確保基因操作(過表達/敲低)的可靠性,支撐了全文分子機制驗證。
• 低細胞毒性保障了炎癥相關基因表達的精準檢測。
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