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上海徠同生物科技有限公司

徠同生物 - 細胞周期-流式細胞增殖實驗(2025 年最新版)

時間:2025-2-13閱讀:101
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徠同生物 - 細胞周期-流式細胞增殖實驗(2025 年最新版)

技術原理

 

EdU5-ethynyl-2' -deoxyuridine),中文全稱為 5 - 乙炔基 - 2' - 脫氧尿苷,是一種新型的胸苷(即胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine)類似物。在細胞進行 DNA 合成的過程中,EdU 能夠憑借其結構特性,替代胸苷摻入到新合成的 DNA 鏈中。

 

從化學反應層面來看,EdU 分子上的乙炔基具有du特的化學活性,它能與經過熒光標記的小分子疊氮化物探針(例如 Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594Azide Alexa Fluor 647 等),在一價銅離子的催化作用下發生高效的共價反應,進而形成穩定的三唑環結構。這一極為迅速的反應,被科研領域稱作點擊反應(Click reaction)。

 

通過點擊反應,新合成的 DNA 會被相應的熒光探針特異性地標記上。如此一來,科研人員便可以借助合適的熒光檢測設備,精準地檢測到處于增殖狀態的細胞,從而為細胞周期和增殖相關的研究提供有力的技術支持。

實驗方法du



  1. 細胞培養:精心挑選合適的細胞系,按照其特定的生長需求,在適宜的細胞培養基中進行培養,為后續實驗奠定良好的細胞基礎。

  2. 轉染或藥物處理:根據實驗設計,對培養的細胞進行轉染操作,導入特定的基因片段;或者施加相應的藥物處理,以觀察細胞在不同條件下的反應。

  3.      EDU 試劑:在細胞處于合適的生長階段時,向培養體系中加入適量的 EDU 試劑,使其能夠順利摻入到正在合成的 DNA 中。

  4. 細胞收集:待 EDU 摻入達到預期時間后,采用合適的方法收集細胞,確保細胞的完整性和活性,為后續的檢測做準備。

  5. 上機檢測:將收集到的細胞進行必要的處理后,置于流式細胞儀上進行檢測,通過分析熒光信號來獲取細胞增殖的相關數據。

 

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