成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

18895348677

technology

首頁   >>   技術文章   >>   細胞轉染的類型及方法

鏡像綺點(上海)細胞技術...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

細胞轉染的類型及方法

閱讀:4114      發布時間:2017-10-9
分享:

轉染(Transfection)是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。轉染的目的是產生重組蛋白,或特異性增強或抑制轉染細胞中的基因表達。細胞轉染有哪些類型和方法呢?

1)根據導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可以分為瞬轉和穩轉。
       

瞬轉

穩轉

導入的DNA沒有整合到基因組中,而是保留在細胞核上

導入的DNA整合到基因組中

導入的遺傳物質不傳遞到子代; 遺傳改變只是暫時的

導入的遺傳物質能夠代代相傳;遺傳改變是*的

不需要選擇性篩選

需要選擇性篩選出穩定轉染的細胞

DNA載體和RNA都可用于瞬時轉染

只有DNA載體可用于穩定轉染;RNA本身不能穩定地導入細胞中

導入的遺傳物質的高拷貝數導致高水平的蛋白質表達。

單拷貝數或低拷貝數的穩定整合的DNA導致較低水平的蛋白質表達。

通常在轉染后24-96小時內收獲細胞。

需要2-3周的時間篩選出穩定轉染的細胞克隆。

通常不適合使用具有誘導型啟動子的載體的研究。

適用于使用帶有誘導型啟動子的載體的研究。

       2)根據轉染方式可以分為化學,生物,物理方法。
        

轉染類型

轉染方法

原理

應用

特點

化學轉染法

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞

穩轉,

瞬轉

不適用于原代細胞,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用

陽離子
脂質體法

帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞

穩轉,

瞬轉
所有細胞

適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大

DEAE-右旋糖苷法

帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞

瞬轉

相對簡便、結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清

生物轉入法

病毒介導法

通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

穩轉

可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等

逆轉錄病毒

 

特定宿主

但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期,需考慮安全因素

腺病毒

通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

瞬時轉染
特定宿主

可用于難轉染的細胞
需考慮安全因素

物理轉染法
 

Biolistic顆粒傳遞法

將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內逐步釋放表達

瞬轉

可用于:人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入

穩轉,瞬轉
所有細胞

適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大

顯微注射法

用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核

穩轉,瞬轉

轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

二、  脂質體轉染法
1、材料
293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)
2、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養皿、轉染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD
3、實驗步驟
細胞傳代
(1)試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。

......

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 欧美日韩内射一级片| 一区二区人妻无码欧美| 乱公和我做爽死我了A片| 最新在线黄色网址| 啪啪社区| 涩涩片大全百度影音| 欧美久久亚洲精品| 禁止十八成人无限免费观看网站| 中文字幕 日韩有码| 国产精品一区二区久久不卡| AV久久无码AV喷水高潮| 国产亚洲欧美日韩剧的剧情介绍| 日本无码免费久久久精品| 日韩精品一区二区三区影院| 亚洲国产精品嫩草影院久久| 91麻豆精品一二三区在线| 69精品久久久久久| 日韩精品人妻中文字幕在线| 色翁荡息又大又硬又粗肖艳| 久久久精品日韩免费观看| 日本XXX免费高清色视频在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 在线亚洲精品福利网址导航| 亚洲欧美日韩一本一二| 新超碰97在线观人人澡| 亚洲熟女一区二区三区| 熟女视频一区二区在线观看| 工口里番全彩无肉码3D啪啪| 又黄又粗暴的纯肉小说| 久久久久国产精品老熟女| 精品人人搡人妻人人玩A片| 国产麻豆天美果冻视频| 国产亚洲精品久久久久久国| 久久久国产精品免费A片3D| 国产,日韩,欧美在线| 人人澡人摸人人添学生av| 在线播放在线观看影视| 女人张开腿让男人桶爽的| 日韩欧美高清在线字幕| 亚洲 自拍 欧美 小说 综合| 亚洲字幕AV一区二区三区四区|