腫瘤細(xì)胞用RNA指導(dǎo)的CRISPR-Cas9系統(tǒng)能夠的切割掉特定位置的DNA，避免了傳統(tǒng)RNAi技術(shù)中出現(xiàn)的不能*敲除既定基因或者脫靶效應(yīng)問題。利用該項(xiàng)技術(shù)，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)*敲除細(xì)胞既定基因的目的，還能夠隨意改變細(xì)胞核苷酸的序列，甚至能夠編輯原代鼠源細(xì)胞的基因組。因此，利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)靶向敲除原代人源細(xì)胞特定基因，為人類多種疾病中某個或者多個基因功能的研究，進(jìn)一步確定致病的分子機(jī)制提供了一個十分強(qiáng)大的研究途徑。然而，由于原代上皮細(xì)胞自身具有較低的轉(zhuǎn)染效率，而用傳統(tǒng)方法分離得到的原代細(xì)胞本身細(xì)胞數(shù)量就比較少，因此經(jīng)過CRISPR-Cas9系統(tǒng)有效編輯的細(xì)胞得率就更低，如何使得到的目的細(xì)胞傳代增殖從而得到大量該類細(xì)胞，是該項(xiàng)技術(shù)將來研究基因功能和疾病臨床治療中廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵。
   細(xì)胞條件重編程（CR）技術(shù)能夠使上皮細(xì)胞在不改變?nèi)魏位蛐停Ａ羯掀ぜ?xì)胞*性狀的前提下使其突破生命的極限，實(shí)現(xiàn)原代上皮細(xì)胞在體外持續(xù)傳代培養(yǎng)的目的。
   發(fā)表在Gene Therapy上的一篇研究就將CRISPR-Cas9和CR的結(jié)合在一起。該研究團(tuán)隊(duì)利用慢病毒轉(zhuǎn)染策略解釋了CRISPR-Cas9的工作機(jī)制。該慢病毒載體同時表達(dá)sgRNA，Cas-9核酸酶以及嘌呤霉素。gRNA直接靶向結(jié)合MUC18起始密碼子下游的Cas9，靶向結(jié)合該位點(diǎn)會激活異源末端結(jié)合的雙鏈斷裂修復(fù)機(jī)制，該機(jī)制會導(dǎo)致閱讀框密碼子的隨機(jī)插入和刪除，從而實(shí)現(xiàn)“敲除”功能性MUC18蛋白的目的；再將經(jīng)過慢病毒載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞接種在具有嘌呤霉素抗性的滋養(yǎng)層細(xì)胞上篩選成功編輯的細(xì)胞。*個供體細(xì)胞接種密度為1-3.2x104/100mm，前后經(jīng)過39天的時間完成了該項(xiàng)篩選工作；而第二個供體細(xì)胞接種密度為0.5-2.5x105/100mm，前后僅用8天時間即完成了篩選，得到95.6%經(jīng)過編輯的細(xì)胞。通過PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在CR細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)下，該團(tuán)隊(duì)得到了大量MUC18 KO（5個不同基因刪除和1個基因插入）的細(xì)胞群體，并且發(fā)現(xiàn)這些腫瘤細(xì)胞中77%的閱讀框存在5個堿基的缺失，該團(tuán)隊(duì)認(rèn)為這一現(xiàn)象說明雙鏈斷裂修復(fù)過程可能比較青睞于這種刪除效應(yīng)。研究人員用不同TLRs激活劑感染2D和ALI 3D培養(yǎng)的MUC18 kO細(xì)胞，來模擬細(xì)菌和病毒對肺部造成感染，該研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)了病原體感染后MUC18基因在呼吸道上皮細(xì)胞中的促炎作用。
≥95.0%    規(guī)格:        *：    Farrerol    杜鵑素    
≥98%    規(guī)格:        *：    Tiliroside    椴樹苷    
≥98%    規(guī)格:        *：    Ethyl p-hydroxybenzoate    對羥基苯甲酸乙酯    
≥98%    規(guī)格:        *：    P-Coumaric acid    對香豆酸    
≥97%    規(guī)格:        *：    tuberostemonine    對葉百部堿    
≥98%    規(guī)格:        *：    Docetaxel    多烯紫杉醇    
≥98%    規(guī)格:        *：    Curdione    莪二酮/莪術(shù)二酮
 腫瘤細(xì)胞