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原代細(xì)胞 凍存及復(fù)蘇

時(shí)間:2017-9-4閱讀:421
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為了保存原代細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,zui終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。
復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng),一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),按要求以一定的量(以每毫升細(xì)胞數(shù)表示)接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好,形態(tài)是否正常,有無(wú)污染,培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。
一般原代細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期(數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等),在潛伏期細(xì)胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng),將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代,而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì),也可能僅有不死性(Immortality)而無(wú)惡性。
IL11RA     Others    Canine    狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
IL1RL1     Others    Mouse    小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
ANTXR2     Others    Mouse    小鼠 ANTXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
AMICA1     Others    Mouse    小鼠 AMICA1 / JAML 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
CD276     Others    Mouse    小鼠 B7-H3 / CD276 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
Spike     Others    SARS    SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
HA     Others    H2N2    甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
原代細(xì)胞

 

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