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大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒的檢測技術

時間:2017-5-10閱讀:943
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大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒基本信息

脂肪酸合成酶 fatty acid synthetase 乙酰CoA+7丙=酸CoA+14NADPH+14H+→棕櫚酸+7CO2+8CoA+14NADP++6H2O。催化上述反應的酶稱為脂肪酸合成酶,不過酵母酶的zui終產物是棕櫚酸CoA。如圖所示,在丙二酸基和乙酰基縮合時,在每次延長C2單位的同時發生還原反應,在這個復雜的反應中,各有相應的酶參與作用。而酰基以CoA轉移到酰基載體蛋白(ACP)上,以與此蛋白質結合的形態進行反應。通過如圖所示的反應反復進行可生成棕櫚酸。在大腸桿菌中,各部分反應的酶以及ACP是不結合在一起的,但在動物和酵母中,各種酶是結合型,形成所謂多酶復合體。

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)elisa試劑盒的檢測技術 

雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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