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如何用ELISA試劑盒,來測試大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β,RAT TGF-β ELISA KIT

時間:2014-3-12閱讀:1260
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雌激素對去勢大鼠骨折愈合早期TGF-β表達(dá)的影響
 

初步探討戊酸雌二醇在骨質(zhì)疏松性骨折愈合過程中的作用,并通過其對TGF-β的影響進一步探討其作用機制,為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松性骨折的治療提供理論依據(jù)。 方法:選用6月齡雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只,實驗分為SHAM組(假手術(shù)組)、OVX組(去勢組)、補佳樂組。除SHAM組外,其余各組均切除雙側(cè)卵巢建立骨質(zhì)疏松動物模型。去勢后8周各組行右股骨骨折建立骨折模型,同時補佳樂組按0.104(mg/kg/d)灌胃。三組均在骨折后第2、4、6、8周處死大鼠后行放射學(xué)觀察骨痂變化,骨痂HE染色及成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞計數(shù),并采用免疫組織化學(xué)的方法,觀察各階段骨痂TGF-β的表達(dá)變化及半定量分析。 結(jié)果:1.放射學(xué):OVX組骨痂密度影低,8周時OVX組骨折線仍然存在,SHAM組和補佳樂組骨折線模糊甚至消失。2、骨痂組織學(xué):OVX組骨小梁表面破骨細(xì)胞明顯增多,成骨細(xì)胞也較多,呈骨高轉(zhuǎn)換狀態(tài)。8周時骨小梁變細(xì)、中斷,軟骨成分仍較多,軟骨性骨痂向骨性骨痂轉(zhuǎn)化緩慢;SHAM組和補佳樂組隨骨折愈合骨小梁逐漸增加成熟,小梁骨粗大,排列緊密,骨小梁表面成骨細(xì)胞體積大,胞漿豐富,破骨細(xì)胞減少。3.成骨、破骨細(xì)胞指數(shù):2,4周OVX組破骨細(xì)胞指數(shù)大于補佳樂組和SHAM組。成骨細(xì)胞指數(shù)在三組間無顯著性差異。4.TGF-β的免疫組化:OVX組2周時陽性細(xì)胞主要是纖維組織內(nèi)的成纖維樣間充質(zhì)細(xì)胞和軟骨細(xì)胞,4周時軟骨細(xì)胞及周圍基質(zhì)陽性著色。8周時成骨細(xì)胞及周圍類骨質(zhì)弱陽性著色,肥大的軟骨細(xì)胞陽性內(nèi)表達(dá)少或無。補佳樂組2周時軟骨細(xì)胞出現(xiàn)強陽性染色,4周時成骨細(xì)胞內(nèi)陽性染色增強,周圍基質(zhì)也可見陽性染色,軟骨細(xì)胞內(nèi)很少或無陽性表達(dá)。8周時軟骨細(xì)胞內(nèi)染色陰性,陽性表達(dá)主要位于周圍類骨質(zhì)。SHAM組與補佳樂組類似。5.TGF-β半定量分析:各組在2周時蛋白陽性表達(dá)積分光密度值達(dá)到峰值,以后逐漸下降,4周后下降明顯。不同時間點OVX組積分光密度值均明顯低于SHAM組和補佳樂組。 結(jié)論⒈本實驗結(jié)果顯示補佳樂(戊酸雌二醇)減少破骨細(xì)胞數(shù)目,增加了成骨細(xì)胞活性,抑制骨吸收、促進骨形成,抑制了去勢后骨的高轉(zhuǎn)換狀態(tài),促進軟骨性骨痂向骨性骨痂轉(zhuǎn)化,提示戊酸雌二醇對于促進絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松性骨折早期愈合是有效的。 ⒉TGF-β在補佳樂組和SHAM組的表達(dá)均明顯高于OVX組,且主要表達(dá)于處于功能活躍期的軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞及其周圍基質(zhì)。提示TGF-β促進軟骨和骨形成,抑制骨吸收,是骨折愈合中重要的細(xì)胞因子之一,雌激素可促進TGF-β的分泌,是雌激素促進骨質(zhì)疏松性骨折愈合可能的機制之一。
 

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