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RT-qPCR需要注意的那些事，你都了解嗎？在RT-qPCR實(shí)驗中不論是實(shí)驗小白，都會遇到各種不同的實(shí)驗問題。解決問題不僅要浪費(fèi)額外的樣品和試劑，還要占用大量的時間一遍遍的重復(fù)和分析，真是被實(shí)驗折磨得焦頭爛額。那實(shí)驗過程中應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)呢？小翊精心為大家總結(jié)了RT-qPCR實(shí)驗的注意事項，希望助小伙伴們一臂之力。RT-qPCR實(shí)驗包括RNA提取與質(zhì)量評估，逆轉(zhuǎn)錄和qPCR三大步驟，每個步驟都有很多注意事項，才能做出可靠的數(shù)據(jù)。下面由小翊給您詳細(xì)介紹。RNA質(zhì)量評估在RT-qPCR實(shí)驗中，RNA
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NGS在病原微生物檢測中的應(yīng)用背景相關(guān)由病原微生物引起的感染性疾病是臨床面臨的常見的疾病之一，并且隨著人群結(jié)構(gòu)變化、環(huán)境污染以及藥物濫用等因素的影響，病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的趨勢，逐步威脅人類健康。隨著測序技術(shù)的飛速發(fā)展，NGS已逐步應(yīng)用于感染性疾病的診斷、治療和監(jiān)測，在病原微生物鑒定、分型、耐藥突變檢測及新型病原體鑒定方面有其*的優(yōu)勢。病原微生物檢測現(xiàn)狀快速準(zhǔn)確的診斷可以對病情進(jìn)行監(jiān)控，提供有效治療，控制疾病的蔓延。目前常用的病原微生物分子檢測方法主要有：PCR技術(shù)（包括常規(guī)PCR以及qPC
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NGS在腫瘤檢測中的那些事兒一、背景介紹20世紀(jì)以來，癌癥已成為困擾人類健康的主要危害之一。根據(jù)2019年國家癌癥中心發(fā)布的2015年全國//////新癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)，2015年惡性腫瘤發(fā)病約392.9萬人，死亡約233.8萬人。平均每天超1萬人被確診為癌癥，每分鐘7.5個人確診癌癥。癌癥負(fù)擔(dān)呈持續(xù)上升態(tài)勢，近10多年來，惡性腫瘤發(fā)病率每年保持約3.9％的增幅，死亡率每年保持2.5％的增幅。因而腫瘤基因突變檢測對指導(dǎo)腫瘤靶向治療、耐藥監(jiān)測及預(yù)后判斷有重要意義。圖1：中國2015年惡性腫瘤發(fā)病與死亡
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干貨分享|磁珠常見問題與解決方案高通量測序技術(shù)的跨越式發(fā)展，使測序能力大幅上升。在整個NGS工作流程中，磁珠是*的產(chǎn)品。磁珠通過磁顆粒活性基團(tuán)在一定條件下可與核酸結(jié)合和解離的原理，將樣本中目的片段分離?？蓪?shí)現(xiàn)對核酸樣本的高通量自動化操作，廣泛應(yīng)用于基因測序以及分子診斷領(lǐng)域。看起來很簡單的純化/分選實(shí)驗，卻在實(shí)際實(shí)驗中有各種意外的情況。那關(guān)于磁珠產(chǎn)品選擇和產(chǎn)品使用方面有什么需要注意的事項呢？接下來小翊將從磁珠的外觀、儲存、應(yīng)用和使用效果逐一對癥分析，希望能幫助大家了解磁珠實(shí)驗中的那些事。磁珠外觀Q
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Western blot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體
Westernblot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體——衡量WB成功的標(biāo)尺何為內(nèi)參抗體、何為標(biāo)簽抗體？一內(nèi)參抗體內(nèi)參即內(nèi)部參照（InternalControl），類似于熒光定量實(shí)驗的內(nèi)參基因，對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(HousekeepingProteins)，它們在不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，常用它作為檢測目的蛋白表達(dá)水平變化時來做參照物。2內(nèi)參抗體的選擇：（1）樣本種屬來源哺乳動物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lami -
D-熒光素原理D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（Transferrin，TRF、Tf），負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總
