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[供應(yīng)]MMP-9-基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)ELISA 試劑盒

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更新時(shí)間:2025-04-03 14:05:35
有效期:2025年4月3日 -- 2025年10月4日
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基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)ELISA 試劑盒 matrix metalloproteinases-9kit!本公司長期經(jīng)營代理試劑盒,價(jià)格實(shí)惠,質(zhì)量保證,價(jià)格請(qǐng)咨詢?cè)诰€人員。
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基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)ELISA 試劑盒

ELISA用血清來檢測(cè),首先血液要經(jīng)過至少半個(gè)小時(shí)的凝集,然后取血清。將酶復(fù)合物用稀釋液稀釋后,加血清及陰性、陽性對(duì)照,還有就是質(zhì)控品(這是嚴(yán)格的要求,它的范圍必須在質(zhì)控范圍內(nèi))。經(jīng)過一個(gè)小時(shí)的孵育,然后洗板,加底物,半個(gè)小時(shí)避光反應(yīng)后加終止液即完成反應(yīng)部分,然后就是讀數(shù)。由數(shù)值來判斷結(jié)果的陰性或陽性。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)ELISA 試劑盒

競(jìng)爭(zhēng)法

  1. 競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:

  2. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

  3. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

  4. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來。

  5. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

    當(dāng)需要偵測(cè)無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)ELISA 試劑盒

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

5.   測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

6.   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

 


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