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鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原的方法
閱讀：1741發(fā)布時(shí)間：2019-4-28
鮭魚ELISA試劑盒常用于檢測(cè)ELISA法定量測(cè)定血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中的含量，那么如何使用鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原，常用的方法有雙抗體夾心法，下面我們來仔細(xì)說說。
1. 包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過一晚上。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
以上就是鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法，希望對(duì)大家的檢測(cè)有所幫助。
1. 包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過一晚上。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
以上就是鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法，希望對(duì)大家的檢測(cè)有所幫助。
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