基因組編輯工具-CRISPR/Cas9
繼ZFN（Zinc Finger Nucleases）技術后，Merck在2013年推出新一代基因組編輯工具--CRISPR/Cas9，讓研究人員以更快、更經濟的方式實現基因組特定位點的編輯。

基因組編輯工具-CRISPR/Cas9

繼ZFN（Zinc Finger Nucleases）技術后，Merck在2013年推出新一代基因組編輯工具--CRISPR/Cas9，讓研究人員以更快、更經濟的方式實現基因組特定位點的編輯。憑借過去10年在基因組編輯領域的豐富經驗積累以及專業的生物信息學平臺，Merck已經成功設計出覆蓋人類，小鼠和大鼠三個物種的所有基因的CRISPR/Cas9載體，并可以提供在線定制服務，以及完整的CRISPR實驗workflow解決方案。此外，默克與Sanger Institute合作開發了人、小鼠全基因組CRISPR 文庫，以幫助科學家實現基因功能的快速篩選、規模化的模型建立以及藥物作用篩選等。

• 高效：優化的載體設計，大限度提高轉染效率，簡化篩選工作
• 特異：特殊的gRNA設計和雙切口酶系統，大限度提高特異性
• 全面：產品齊全，可提供質粒、RNA、慢病毒載體、RNP等形式，涵蓋人、大鼠、小鼠、植物等多個物種，更有Sanger Arrayed和Broad Pools全基因組文庫以及重要通路的亞文庫
• 掌控：強大的慢病毒全基因組文庫可輕松進行高通量篩選，全面掌控人或小鼠的基因組

 

CRISPR/Cas9 基因編輯工具

• Sanger Arrayed Lentiviral CRISPR   Libraries • Lentiviral CRISPR Pools Libraries • CRISPR/Cas9單載體表達系統 • CRISPR Cas9-D10A雙切口酶系統 • SygRNA® Cas9 RNP系統 • CRISPR/Cas9基因激活表達載體 • CRISPR/Cas9在植物中的應用 • Cas9蛋白 • CRISPR對照 (DNA and Virus)

CAS9D10AP Sigma

CRISPR Cas9-D10A 切口酶質粒

CRISPR Cas9-D10A Nickase Plasmid

 

別名: CAS9D10A 質粒

 

 

貨號與規格	庫存		價格 (CNY)	數量
CAS9D10AP-1EA	需要從國外調貨，預計到貨時間 2018.09.06 - 詳情		2,867.67

 

 

• 性質

Related Categories	CRISPR-Cas9, Cas9-only (DNA, mRNA, and virus),分子生物學, 功能基因組和RNAi
shipped in	dry ice
storage temp.	−20°C

產品描述

Components

1管含1μg 的Cas9-D10A 切口酶質粒。

請注意，該產品不含向導RNA序列。向導RNA必須通過定制CRISPR產品選項卡單獨購買。

Preparation Note

Sigma CRISPR質粒產品為小量提取包裝，可能不適用于轉染到特殊類型的細胞中。為得到佳結果，我們建議在轉染前使用無內毒素的DNA純化試劑盒大量提取質粒。

Physical form

Sigma Cas9-D10A切口酶質粒的產品形式是濃度為20ng/μl的50µl溶液。

Application

功能性基因組學/靶點驗證 

• 在多種細胞系中進行基因敲除
• 對不適合于RNAi的基因進行*敲除
• 建立基因敲入細胞系，將啟動子、融合標簽或報告基因整合到內源性基因中

   

  Features and Benefits

  Cas9-D10A單個載體的應用可延伸至所有U6-向導RNA質粒。為優化Cas9與向導RNA的比例，可改變Cas9和向導RNA的用量。新證據表明，CRISPR內切酶的脫靶效應是一個重要問題。為了解決這一問題，Sigma開發的配對切口酶技術可將CRISPR DNA識別域的長度延長至與ZFN和TALEN相近。我們的經驗表明，基于Cas9-D10A突變體的配對切口酶是可靠的。我們的開發工作也證明，產生活性配對切口酶的關鍵因素在于gRNA在5’至5’方向上的定位。對于配對CRISPR切口酶質粒的遞送，我們建議使用由Cas9-D10A 表達載體和2個U6驅動型gRNA組成的三元系統。為了簡化配對切口酶的使用，可通過Sigma的在線工具進入預設計配對切口酶庫。請查看Sigma在線CRISPR產品，獲取新設計方案集。

  Principle

  CRISPR/Cas是細菌和古細菌的一種防御系統，可用來對抗入侵的病毒和質粒。來自釀膿鏈球菌的II型CRISPR/Cas系統包含兩種分子元件，即一個Cas9蛋白和一個非編碼向導RNA（gRNA），該系統經過基因改造而被用于真核系統中。Cas9核酸內切酶可在單個gRNA的引導下，在基因組位置上引入DNA雙鏈斷裂（DSB）。與鋅指核酸酶（ZFN）誘導的DSB相似，細胞隨后會激活內源性DNA修復程序，即非同源性末端接合（NHEJ）或同源重組修復機制（HDR），對目標DSB進行修復。

  General description

  CRISPR Cas9-D10A切口酶表達質粒使用CMV啟動子，可獲得較強的Cas9瞬時表達。您可以使用MluI和NheI酶切將CMV替換為其它啟動子。同時，使用XbaI酶切可使Cas9-D10A表達質粒線性化，得到基于T7的mRNA產物。

  Legal Information

  CRISPR正在申請中

  Other Notes

  為了介導DNA位點特異性雙鏈斷裂，必須與兩條U6-gRNA質粒一起使用。 
  
  文獻中使用的標準轉染濃度范圍為≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9-D10A 質粒結合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA質粒。（上述所有濃度均假設是對0.5~1百萬個細胞進行核轉染）