一、藥物誘導基因敲除實驗核心系統及原理

1. 他mo昔芬（Tamoxifen）誘導系統

• 時間可控性強，避免胚胎期致死問題；

• 高靈敏度版本（如Cre-ERT2）對4-OHT的敏感性提升10倍。

• 原理：將Cre重組酶與突變型雌激素受體（ER-LBD）融合形成Cre-ER(Tam)融合蛋白。未給藥時，該蛋白與熱休克蛋白（HSP90）結合并滯留于細胞質；給藥后，他mo昔芬與ER結合，釋放Cre進入細胞核，介導loxP位點間的重組。

• 優勢：

2. 四環素誘導系統（Tet-On/Tet-Off）

• Tet-Off系統：無需四環素時，tTA蛋白激活Cre表達；給予多xi環素（Dox）則抑制Cre活性，適用于持續敲除場景。

• Tet-On系統：需Dox激活rtTA蛋白才能啟動Cre表達，適用于短期誘導。

• 應用：常用于發育階段特異性基因功能研究，如肺上皮細胞基因敲除。

3. 干擾素誘導系統（Mx1-Cre）

• 通過注射polyI:C或干擾素誘導Cre表達，適用于免疫細胞或肝臟等干擾素響應組織的研究。

二、藥物誘導基因敲除實驗設計流程

1. 構建Flox小鼠：在目標基因兩側插入loxP序列，確保基因正常功能不受影響。

2. 選擇Cre工具鼠：根據實驗需求選擇組織特異性或藥物誘導型Cre品系（如Alb-CreERT2用于肝臟特異性敲除）。

3. 藥物處理：

• 他mo昔芬：成年小鼠連續5天腹腔注射（75-100 mg/kg），溶解于玉米油或葵花籽油。

• 多xi環素：通過含藥飼料（600 mg/kg）連續喂養14天。

4. 表型分析與驗證：通過PCR、Western blot或熒光報告系統確認敲除效率。

三、應用場景

1. 疾病模型構建：如腫瘤研究中誘導性敲除致癌基因，觀察腫瘤發生動態。

2. 發育生物學：研究特定發育階段（如胚胎期或成年期）基因功能。

3. 組織特異性研究：結合組織特異性啟動子（如神經元Nestin啟動子），解析基因在特定細胞類型中的作用。

四、注意事項

1. 藥物交叉污染：處理組與對照組需分籠飼養，避免他mo昔芬通過糞便交叉誘導。

2. 脫靶效應：部分Cre品系存在本底活性（如Cre-ERT2的泄露表達），需設置嚴格對照。

3. 劑量優化：藥物濃度和給藥頻率需根據動物年齡、品系調整，避免毒性。