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如何利用LC-MS/MS進行高通量肽組學分析?檢測技術服務詳情介紹
肽組學(Peptidomics)是研究生物樣本中天然存在的內源性肽段(通常小于10 kDa)的科學領域。這些肽段廣泛參與神經調節、免疫應答、激素信號、代謝控制等生理活動,具有重要的功能性和潛在標志物價值。相比蛋白組學,肽組學更貼近dànbáizhì實際裂解、加工和翻譯后修飾的狀態,能敏銳反映生物系統的動態調控。但由于肽段短、豐度低、異構多,研究難度較高。
為克服這些挑戰,液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)成為高通量肽組學分析中zuì關鍵的技術平臺。它不僅能jīngzhǔn識別肽段序列,還可實現高通量、廣覆蓋、多樣本并行的表達差異分析。
一、LC-MS/MS在高通量肽組學分析中的角色定位
1、什么是LC-MS/MS?
(1)LC(Liquid Chromatography):將復雜肽段混合物分離,按親水性/疏水性順序進入質譜,提高識別率
(2)MS(Mass Spectrometry):測定肽段的質量(m/z),初步判斷其分子量
(3)MS/MS(Tandem MS):將目標肽段碎裂,再次檢測其碎片模式,從而推斷氨基酸序列
在肽組學中,LC-MS/MS技術實現了從復雜生物樣本中分離、識別、定量內源肽段的全過程。
二、高通量肽組學分析完整流程解析
1、樣本收集與肽段富集
內源性肽段廣泛存在于以下樣本中:
(1)血清 / 血漿
(2)尿液
(3)腦脊液
(4)組織勻漿
(5)細胞上清或裂解液
富集方法:
百泰派克采用多策略組合富集方案,提升短肽、多肽修飾種類的捕獲效率。
2、液相色譜分離(LC)
內源性肽段種類繁多,保留行為復雜,LC階段主要任務是在進入質譜前按理化性質將肽段分離,提高鑒定深度。
(1)使用納升流量nanoLC系統(如EASY-nLC 1200)提高靈敏度
(2)常用C18反相色譜柱,緩沖體系為水-乙腈梯度洗脫
(3)分離時間通常為60–120分鐘,以平衡通量與深度
3、串聯質譜采集(MS/MS)
常見質譜采集模式:
百泰派克支持DDA+DIA聯合采集,結合肽組數據庫輔助識別,提升肽段解析效率。
4、數據處理與肽段識別
(1)數據庫搜索
* 使用如 PEAKS、MaxQuant、Spectronaut 等工具進行肽段匹配
可接入UniProt、Swiss-Prot、RefSeq 等數據庫
支持定制搜索非典型起始肽、修飾肽、剪接肽段
(2)定量分析
* Label-free、iTRAQ、TMT 等定量方式可選擇
差異肽段篩選:fold change + P 值 + FDR(jiǎfā現率)控制
(3)功能注釋
* GO富集、KEGG通路映射、蛋白-肽段反向追蹤
可構建“肽段-母體蛋白-功能通路”三級網絡
三、LC-MS/MS在高通量肽組學分析中的技術優勢
四、LC-MS/MS肽組學的科研應用
神經科學:分析神經遞質肽、記憶調控肽段(如神經肽Y)
腫瘤研究:識別腫瘤相關裂解肽段、新抗原或微環境信號肽
免疫學:結合HLA肽組學,解析免疫識別機制
代謝紊亂:發現內分泌調節肽與代謝通路關聯
藥效學研究:監測藥物干預前后肽段表達動態變化
五、百泰派克生物科技:高通量肽組學分析全流程服務
作為國內lǐngxiān的多組學平臺服務商,百泰派克提供從樣本到結論的一站式LC-MS/MS肽組學研究服務,包括:
? 多樣本類型處理(組織、液體、細胞等)
? 富集策略優化與磁珠方案定制
? 高分辨LC-MS/MS平臺(Orbitrap Exploris、Q Exactive等)
? DDA、DIA、PRM等采集模式任選組合
? 多維度差異分析 + 通路富集 + 網絡構建
? 支持與蛋白組、代謝組、轉錄組聯合分析
肽組學為理解復雜生物過程提供了更高維的窗口,而LC-MS/MS正是將這些肽段從混沌中分離、識別、定量的“核心wǔqì”。它讓我們能夠走近真實的蛋白加工過程、功能片段表達譜與病理調控機制。百泰派克生物科技將繼續依托*的質譜平臺、經驗豐富的生信團隊和嚴謹的服務體系,幫助科研人員zuì大限度釋放高通量肽組學分析的科學價值。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術*,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!