【染色步驟】

（一）固定細胞

操作：吸棄培養液，用預熱的1×PBS清洗2次后，加入4%多聚甲醛（溶于PBS）室溫固定10分鐘。

注意：避免使用含甲醇的固定劑，否則會破壞肌動蛋白結構。

（二）透化（可選）

操作：用0.5% Triton X-100或丙酮處理細胞5分鐘，增強探針滲透性。

注意：透化時間過長可能導致細胞結構損傷，需根據細胞類型優化。

（三）染色液配制

儲存液制備：將凍干粉室溫回溫20分鐘后，加入甲醇或DMSO溶解至20-100 μM，分裝后-20℃避光保存。

工作液制備：用1×PBS稀釋儲存液至80-200 nM（推薦100 nM起始濃度），含1% BSA可降低非特異性結合。

（四）孵育與洗滌

操作：每孔（96孔板）加入200 μL工作液，室溫避光孵育30-60分鐘（4℃至37℃均可）。

洗滌：用PBS清洗3次，每次30秒，去除未結合探針。

（五）復染與封片

核染色（可選）：用DAPI染色30秒，再用PBS清洗。

封片：滴加抗淬滅封片劑，蓋玻片封片后避光保存（可4℃保存24小時）。

【技術參數】

試劑名稱：5-TAMRA Phalloidin，5-TAMRA鬼筆環肽

中文名稱：5-羧基四甲基羅丹明 鬼筆環肽

激發波長：555 nm

發射波長：575 nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

【描述與結構】

5-TAMRA鬼筆環肽是一種熒光標記的鬼筆環肽探針，由鬼筆環肽與 5-羧基四甲基羅丹明通過化學偶聯形成。

它應用于細胞骨架研究，是對纖維狀肌動蛋白的特異性標記和動態分析。

組成與結構

鬼筆環肽：一種天然雙環七肽毒素，來源于毒蘑菇鬼筆鵝膏，分子量約 789 Da，通過氫鍵和疏水作用特異性結合F-actin亞基界面，不與單體肌動蛋白（G-actin）結合。

5-TAMRA：橙紅色熒光染料，激發波長（Ex）為 555-565 nm，發射波長（Em）為 575-580 nm，量子產率高且光穩定性強，適合多色成像。

【相關的試劑】

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Lucifer Yellow CH dilithium salt

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Human Dil-Very Low DensityLipoprotein

Acti-stain555phalloidin橙紅色熒光標記鬼筆環肽

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注意：本試劑用于科研領域，其他用途概不適用！

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