試劑名稱：Recombinant Cholera Toxin B subunit，CF568-conjugated重組霍亂毒素B亞基（CF568標記，紅色熒光）

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。

產地：西安強化生物

一、描述與基本特性：

重組霍亂毒素B亞基（CF568標記，紅色熒光）由5個相同的非糖基化亞基構成五聚體環狀結構，每個亞基含103-124個氨基酸（信號肽21個），分子量約11.6 kDa/亞基，總分子量約58 kDa。

五聚體構象：孔直徑約1.2 nm，通過氫鍵和疏水作用維持穩定性，此構象是其高親和力結合GM1的關鍵。

GM1結合機制：通過亞基殘基（Gly33、Trp88等）以“雙指緊夾”模式嵌入GM1的寡糖鏈，形成氫鍵和疏水接觸，結合親和力達nM級。

生物學功能

靶向遞送：結合GM1后誘導細胞膜內吞，協助毒素A亞基進入細胞。

免疫佐劑：激活樹突細胞、促進TGF-β分泌，增強黏膜免疫反應。

神經示蹤：被軸突末端吸收后逆行運輸至神經元胞體，標記神經回路。

脂筏標記：GM1富集于脂筏，用于動態追蹤膜信號轉導 。

二、實驗操作與優化指南

試劑制備與儲存

復溶方法：凍干粉室溫平衡30分鐘，離心后加無菌水或PBS至1 mg/mL母液，分裝避光保存（4℃穩定3個月，-20℃穩定6個月）。

工作液配制：用預冷HBSS + 0.5% BSA稀釋至400 ng/mL–1 μg/mL，減少非特異性結合。

染色流程

活細胞表面標記：

4℃預冷緩沖液洗滌細胞；

加入染色工作液，4℃避光孵育30分鐘（抑制內吞）；

固定后成像，可選Hoechst 33342復染核。

組織切片染色：Triton X-100透化，5% BSA封閉，CTB-CF568（1:200）室溫孵育2小時。

成像參數

共聚焦顯微鏡：激發561 nm，發射濾片580–620 nm；需設陰性對照排除自發熒光 。

三、技術優勢與比較

CTB-CF568

亮度：較高（150,000消光系數）

光穩定性：較強（適合長時間成像）

特異性：GM1高親和力（nM級）

多功能性：示蹤、脂筏、內吞、免疫佐劑

傳統標記物（如Alexa Fluor 568）

亮度：中等

光穩定性：易光漂白

特異性：依賴抗體，可能非特異結合

多功能性：通常單一功能

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用于科研相關領域，不能用于人體實驗！

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