蛋白質N端測不出來？2大常見問題+解決方案，快收藏！檢測技術服務詳情介紹

在dànbáizhì組學研究中，N端測序對于解析dànbáizhì起始位置、翻譯后修飾（PTMs）、信號肽剪切以及降解路徑等生物學問題具有重要意義。然而，很多科研人員在實際實驗中常常遇到這樣一個令人頭疼的現象：dànbáizhìN端怎么也測不出來！

本文將從機制出發，拆解兩個zuì常見的技術瓶頸，并提供切實可行的解決方案，助力你提升N端檢出率。如果你也在做蛋白修飾、蛋白降解或是抗體驗證的相關項目，這篇文章值得收藏。

問題一：dànbáizhìN端被阻斷，質譜無法識別

1、背后原因：翻譯后修飾掩蓋N端

在真核細胞中，dànbáizhì翻譯完成后，N端常常會經歷一系列翻譯后修飾，例如：

（1）N端乙酰化（N-terminal acetylation）

（2）甲酰化（Formylation）

（3）信號肽或起始jiǎliúānsuān（Met）剪切

這些修飾會使N端的游離氨基失活，從而影響Edman降解或質譜對真實N端的識別，導致信號缺失或誤判。

2、解決方案：靶向性N端富集技術

為了提高檢測靈敏度，當前主流方案是采用專一性N端標記和富集策略，如：

（1）TAILS（Terminal Amine Isotopic Labeling of Substrates）

（2）COFRADIC（Combined Fractional Diagonal Chromatography）

（3）N-terminomics專用試劑盒或標簽技術

這些方法通過封閉內部肽段的氨基，僅對真實N端進行選擇性標記與富集，從而顯著提升檢測信號和準確性。在百泰派克生物科技，我們已建立成熟的TAILS + 高分辨質譜聯合平臺，適用于哺乳動物、酵母、植物等多種樣本類型，幫助客戶高效解析dànbáizhìN端結構和修飾狀態。

問題二：蛋白酶切位點靠近N端，導致N端肽段缺失

1、背后原因：酶切策略設計不當

多數蛋白組學實驗采用yídànbáiméi（Trypsin）進行蛋白酶解，但yíméi優先切割K/R位點，而dànbáizhìN端通常不具備理想的切割條件，容易造成：

（1）N端肽段過短（<6 aa），不被質譜識別

（2）或N端肽段中缺乏帶電基團，電離效率低

這也是很多樣本中N端信號“沉默”的根本原因之一。

2、解決方案：多酶聯合切割策略

為提高N端檢測效率，可采用：

（1）Lys-C、Asp-N、Glu-C 等特異性蛋白酶

（2）雙酶或順序酶解（如 Lys-C + Trypsin）

（3）調整酶解緩沖液pH，優化切割位點暴露

此外，搭配高靈敏的LC-MS/MS系統與高分辨質譜掃描參數優化，也能顯著提升N端肽段的檢測能力。百泰派克生物科技提供靈活的多酶酶解方案，并結合Orbitrap Exploris 480等優良平臺進行N端靶向檢測，為抗體藥物表征、蛋白降解靶點篩選等提供強有力的數據支持。

總結：蛋白N端檢測不全，是技術盲區也是優化突破口

隨著dànbáizhì翻譯后修飾研究和靶向降解藥物開發的興起，jīngzhǔn的N端識別將越來越重要。如果你正在規劃相關項目，歡迎聯系百泰派克生物科技，我們可為你定制zuì合適的N端序列研究方案，從前處理到數據解析全流程支持。百泰派克生物科技為廣大客戶提供蛋白N端序列分析服務。我們的“一站式”服務能為您節省時間和精力，幫助您更高效地開展相關研究。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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