abs60341 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) | ¥ 1215 |
訂貨量 | ≥1件 |
- 公司名稱 愛必信(上海)生物科技有限公司
- 品牌 absin
- 型號(hào) abs60341
- 產(chǎn)地 中國
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/6/13 17:10:34
- 訪問次數(shù) 422
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
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貨號(hào) | abs60341 | 主要用途 | 科研 |
產(chǎn)品描述 | |||||||||||||||||||||||||
描述 | Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)為檢測(cè)基因的表達(dá)量提供有效的手段,在 DLR檢測(cè)中,螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)和海腎螢光素酶(Renilla luciferase)的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測(cè)。先以螢光素(Luciferin)為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活性,然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì),同時(shí)加入腔腸素(Coelenterazine)檢測(cè)海腎螢光素酶的活性,實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系,可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5' 啟動(dòng)子區(qū)克隆在 Luciferase 的上游,或把 3'-UTR 區(qū)克隆在 Luciferase 的下游,構(gòu)建成報(bào)告基因(Reporter gene)質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞,通過檢測(cè)螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參,以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。 螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為 61 kD 的蛋白,在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化螢光素生成氧化螢光素(Oxyluciferin),在螢光素被氧化的過程中,會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。海腎螢光素酶是一種分子量約為 36 kD 的蛋白,在氧氣存在的條件下,可以催化腔腸素氧化成腸酰胺(Coelenteramide),在腔腸素氧化的過程中也會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。本試劑盒的光信號(hào)可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。該試劑盒具有檢測(cè)迅速、靈敏度高、檢測(cè)范圍廣,無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。 產(chǎn)品特點(diǎn): 快速:細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。 方便:試劑易于配制,樣品檢測(cè)步驟簡單。 靈敏:能夠檢測(cè)10-20mol的螢光素酶。 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個(gè)數(shù)量級(jí)。 產(chǎn)品組分:
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使用方法 | 1、細(xì)胞裂解 (1)將培養(yǎng)基移除,加 PBS 輕輕洗滌兩次(貼壁細(xì)胞可直接進(jìn)行此操作,懸浮細(xì)胞需離心收集細(xì)胞)。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用無菌水按 4: 1 稀釋組分 A),然后將培養(yǎng)板放在微型震蕩器上室溫震蕩 15 min,充分裂解細(xì)胞。
(2)將裂解產(chǎn)物 10000-15000 rpm 離心 3-5 min,離心后將上清液移入新的 EP 管中進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。 注:細(xì)胞裂解后可立即檢測(cè),也可以凍存,需要時(shí)再檢測(cè)。凍存樣品需融解至室溫再進(jìn)行檢測(cè)。 2、工作液配制 (1)將所有組分恢復(fù)至室溫。 (2)用組分 B 充分溶解組分 C,配制成 0.2 mg/mL 的螢火蟲螢光素酶工作液。 注:螢火蟲螢光素酶工作液不能反復(fù)凍融,若單次實(shí)驗(yàn)用量較少,建議按單次使用量分裝成小規(guī)格。 (3)用組分 D 將組分 E 稀釋成海腎螢光素酶工作液,稀釋方法為 1 ul E 組分加入到 49 µL D 組分中。 注:海腎螢光素酶工作液需現(xiàn)用現(xiàn)配。 3、化學(xué)發(fā)光值檢測(cè) (1)按照儀器操作說明書開啟具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的儀器,如多功能酶標(biāo)儀,設(shè)定參數(shù),測(cè)定時(shí)間為 10 s,測(cè)定間隔為2 s。 (2)每個(gè)樣品測(cè)定時(shí),取樣品 20-100 ul(如果樣品量足夠,請(qǐng)加入 100 ul;如果樣品量不足可適當(dāng)減少用量,但檢測(cè)孔用量需保持一致)。1×Lysis Buffer 為空白對(duì)照。 (3)加入 100 ul 螢火蟲螢光素酶檢測(cè)液,測(cè)定 RLU(relative light unit)值(建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能)。 注:由于該發(fā)光為瞬時(shí)發(fā)光,建議加入螢火蟲螢光素酶工作液后,立即進(jìn)行檢測(cè)。 (4)加入 100 ul 海腎螢光素酶工作液,測(cè)定 RLU(relative light unit)值(建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能)。 (5)在以海腎螢光素酶為內(nèi)參的情況下,用螢火蟲螢光素酶測(cè)定得到的 RLU 值除以海腎螢光素酶測(cè)定得到的 RLU 值。根據(jù)得到的比值來比較不同樣品間目的報(bào)告基因的激活程度。如果以螢火蟲螢光素酶為內(nèi)參,也可以進(jìn)行類似計(jì)算。 | ||||||||||||||||||||||||
儲(chǔ)存/保存方法 | -20℃保存。C 組分建議預(yù)先使用無菌水配置為 2 mg/mL 儲(chǔ)液,B 組分、D 組分及配置為儲(chǔ)液的 C 組分, 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行小批量分裝。所有檢測(cè)工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融。 | ||||||||||||||||||||||||
注意事項(xiàng) | 1、使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底,再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 | ||||||||||||||||||||||||
基本信息 | |||||||||||||||||||||||||
別名 | 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 |