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abs60341 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

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愛必信(上海)生物科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及耗材的高新技術(shù)企業(yè)。公司秉承“為生命科學(xué)創(chuàng)造便利!為客戶創(chuàng)造價(jià)值!為員工創(chuàng)造幸福人生!”的發(fā)展理念,擁有專業(yè)的產(chǎn)品研發(fā)質(zhì)檢團(tuán)隊(duì)、市場(chǎng)營銷團(tuán)隊(duì)及*倉儲(chǔ)物流等管理團(tuán)隊(duì)。榮獲2021年度上海市“專精特新”企業(yè)稱號(hào)。

自營品牌Absin®,主要經(jīng)營產(chǎn)品有:生化試劑(常用生化試劑、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑、熒光染料、激動(dòng)劑/抑制劑,植物提取物)、細(xì)胞生物學(xué)(細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品、血清、基質(zhì)膠、添加劑、檢測(cè)試劑盒)、免疫學(xué)產(chǎn)品、分子生物學(xué)產(chǎn)品、實(shí)驗(yàn)室儀器/耗材、產(chǎn)品定制和檢測(cè)服務(wù)。

Absin還提供一些特色產(chǎn)品:霍亂毒素B亞單位(CTB)、 雞胚提取物(CEE)、 牛腦垂體提取物、 呼吸爆發(fā)試劑盒、 多色免疫組化試劑盒、 mRNA原料等在業(yè)界深受客戶喜歡。

Absin秉承踏實(shí),務(wù)實(shí),求精和不斷創(chuàng)新的精神為中國科學(xué)家提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,努力打造屬于中國自己的生物試劑品牌,為廣大科學(xué)家提供更全面更豐富更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號(hào) abs60341 主要用途 科研
產(chǎn)品描述
描述
        Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)為檢測(cè)基因的表達(dá)量提供有效的手段,在 DLR檢測(cè)中,螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)和海腎螢光素酶(Renilla luciferase)的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測(cè)。先以螢光素(Luciferin)為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活性,然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì),同時(shí)加入腔腸素(Coelenterazine)檢測(cè)海腎螢光素酶的活性,實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系,可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5' 啟動(dòng)子區(qū)克隆在 Luciferase 的上游,或把 3'-UTR 區(qū)克隆在 Luciferase 的下游,構(gòu)建成報(bào)告基因(Reporter gene)質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞,通過檢測(cè)螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參,以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。
        螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為 61 kD 的蛋白,在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化螢光素生成氧化螢光素(Oxyluciferin),在螢光素被氧化的過程中,會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。海腎螢光素酶是一種分子量約為 36 kD 的蛋白,在氧氣存在的條件下,可以催化腔腸素氧化成腸酰胺(Coelenteramide),在腔腸素氧化的過程中也會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。本試劑盒的光信號(hào)可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。該試劑盒具有檢測(cè)迅速、靈敏度高、檢測(cè)范圍廣,無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
快速:細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。
方便:試劑易于配制,樣品檢測(cè)步驟簡單。
靈敏:能夠檢測(cè)10-20mol的螢光素酶。
酶的濃度線性范圍可達(dá)8個(gè)數(shù)量級(jí)。
產(chǎn)品組分:
組分名稱100T10×100T
A 5× Passive Luciferase Lysis Buffer10ml10×10ml
B Firefly Luciferase Assay Buffer10ml10×10ml
CD-Luciferin 2mg10×2mg
DRenilla Luciferase Assay Buffer10ml10×10ml
E50×Coelenterazine200ul10×200ul
使用方法
1、細(xì)胞裂解
(1)將培養(yǎng)基移除,加 PBS 輕輕洗滌兩次(貼壁細(xì)胞可直接進(jìn)行此操作,懸浮細(xì)胞需離心收集細(xì)胞)。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用無菌水按 4: 1 稀釋組分 A),然后將培養(yǎng)板放在微型震蕩器上室溫震蕩 15 min,充分裂解細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)板96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板
細(xì)胞裂解液30ul60ul120ul250ul500ul
注:裂解產(chǎn)物可室溫保存 6 h,-70℃可長期存放(裂解產(chǎn)物不能反復(fù)凍融)。
(2)將裂解產(chǎn)物 10000-15000 rpm 離心 3-5 min,離心后將上清液移入新的 EP 管中進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。
注:細(xì)胞裂解后可立即檢測(cè),也可以凍存,需要時(shí)再檢測(cè)。凍存樣品需融解至室溫再進(jìn)行檢測(cè)。
2、工作液配制
(1)將所有組分恢復(fù)至室溫。
(2)用組分 B 充分溶解組分 C,配制成 0.2 mg/mL 的螢火蟲螢光素酶工作液。
注:螢火蟲螢光素酶工作液不能反復(fù)凍融,若單次實(shí)驗(yàn)用量較少,建議按單次使用量分裝成小規(guī)格。
(3)用組分 D 將組分 E 稀釋成海腎螢光素酶工作液,稀釋方法為 1 ul E 組分加入到 49 µL D 組分中。
注:海腎螢光素酶工作液需現(xiàn)用現(xiàn)配。
3、化學(xué)發(fā)光值檢測(cè)
(1)按照儀器操作說明書開啟具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的儀器,如多功能酶標(biāo)儀,設(shè)定參數(shù),測(cè)定時(shí)間為 10 s,測(cè)定間隔為2 s。
(2)每個(gè)樣品測(cè)定時(shí),取樣品 20-100 ul(如果樣品量足夠,請(qǐng)加入 100 ul;如果樣品量不足可適當(dāng)減少用量,但檢測(cè)孔用量需保持一致)。1×Lysis Buffer 為空白對(duì)照。
(3)加入 100 ul 螢火蟲螢光素酶檢測(cè)液,測(cè)定 RLU(relative light unit)值(建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能)。
注:由于該發(fā)光為瞬時(shí)發(fā)光,建議加入螢火蟲螢光素酶工作液后,立即進(jìn)行檢測(cè)。
(4)加入 100 ul 海腎螢光素酶工作液,測(cè)定 RLU(relative light unit)值(建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能)。
(5)在以海腎螢光素酶為內(nèi)參的情況下,用螢火蟲螢光素酶測(cè)定得到的 RLU 值除以海腎螢光素酶測(cè)定得到的 RLU 值。根據(jù)得到的比值來比較不同樣品間目的報(bào)告基因的激活程度。如果以螢火蟲螢光素酶為內(nèi)參,也可以進(jìn)行類似計(jì)算。
儲(chǔ)存/保存方法
-20℃保存。C 組分建議預(yù)先使用無菌水配置為 2 mg/mL 儲(chǔ)液,B 組分、D 組分及配置為儲(chǔ)液的 C 組分,
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行小批量分裝。所有檢測(cè)工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)

1、使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底,再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、為取得最佳測(cè)定效果,在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí),樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制一致;使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí),宜先把樣品全部加好,然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。
3、螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的波長為 560 nm,海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的波長為 480 nm。
4、為防止孔間干擾,建議使用白色不透光孔板。
5、由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響,所以測(cè)定時(shí),樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
6、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

基本信息
別名
熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖
通過檢測(cè)報(bào)告基因螢光素酶靈敏度,Absin明顯優(yōu)于國外
結(jié)論:Absin與進(jìn)口及國產(chǎn)T*品牌產(chǎn)品相比,螢光值最高,F(xiàn)/R比值與進(jìn)口P*品牌相近
溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用,不支持臨床等研究




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