abs60341 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒
| 參考價(jià) | ￥ 1215 |
| 訂貨量 | ≥1件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 愛必信（上海）生物科技有限公司
- 品牌 absin
- 型號 abs60341
- 產(chǎn)地 中國
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/6/13 17:10:34
- 訪問次數(shù) 416
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
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| 貨號 | abs60341 | 主要用途 | 科研 |
| 產(chǎn)品描述 | |||||||||||||||||||||||||
| 描述 | Firefly & Renilla Assay Kit（雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒）為檢測基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個樣品中依次檢測。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5' 啟動子區(qū)克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 區(qū)克隆在 Luciferase 的下游，構(gòu)建成報(bào)告基因（Reporter gene）質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，通過檢測螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。 螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為 61 kD 的蛋白，在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素生成氧化螢光素（Oxyluciferin），在螢光素被氧化的過程中，會產(chǎn)生光信號。海腎螢光素酶是一種分子量約為 36 kD 的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化腔腸素氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過程中也會產(chǎn)生光信號。本試劑盒的光信號可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 快速：細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。 靈敏：能夠檢測10-20mol的螢光素酶。 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個數(shù)量級。 產(chǎn)品組分：
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| 使用方法 | 1、細(xì)胞裂解 （1）將培養(yǎng)基移除，加 PBS 輕輕洗滌兩次（貼壁細(xì)胞可直接進(jìn)行此操作，懸浮細(xì)胞需離心收集細(xì)胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer（用無菌水按 4: 1 稀釋組分 A），然后將培養(yǎng)板放在微型震蕩器上室溫震蕩 15 min，充分裂解細(xì)胞。
（2）將裂解產(chǎn)物 10000-15000 rpm 離心 3-5 min，離心后將上清液移入新的 EP 管中進(jìn)行后續(xù)檢測。 注：細(xì)胞裂解后可立即檢測，也可以凍存，需要時再檢測。凍存樣品需融解至室溫再進(jìn)行檢測。 2、工作液配制 （1）將所有組分恢復(fù)至室溫。 （2）用組分 B 充分溶解組分 C，配制成 0.2 mg/mL 的螢火蟲螢光素酶工作液。 注：螢火蟲螢光素酶工作液不能反復(fù)凍融，若單次實(shí)驗(yàn)用量較少，建議按單次使用量分裝成小規(guī)格。 （3）用組分 D 將組分 E 稀釋成海腎螢光素酶工作液，稀釋方法為 1 ul E 組分加入到 49 µL D 組分中。 注：海腎螢光素酶工作液需現(xiàn)用現(xiàn)配。 3、化學(xué)發(fā)光值檢測 （1）按照儀器操作說明書開啟具有檢測化學(xué)發(fā)光功能的儀器，如多功能酶標(biāo)儀，設(shè)定參數(shù)，測定時間為 10 s，測定間隔為2 s。 （2）每個樣品測定時，取樣品 20-100 ul（如果樣品量足夠，請加入 100 ul；如果樣品量不足可適當(dāng)減少用量，但檢測孔用量需保持一致）。1×Lysis Buffer 為空白對照。 （3）加入 100 ul 螢火蟲螢光素酶檢測液，測定 RLU（relative light unit）值（建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能）。 注：由于該發(fā)光為瞬時發(fā)光，建議加入螢火蟲螢光素酶工作液后，立即進(jìn)行檢測。 （4）加入 100 ul 海腎螢光素酶工作液，測定 RLU（relative light unit）值（建議酶標(biāo)儀設(shè)置 Shaking 混勻功能）。 （5）在以海腎螢光素酶為內(nèi)參的情況下，用螢火蟲螢光素酶測定得到的 RLU 值除以海腎螢光素酶測定得到的 RLU 值。根據(jù)得到的比值來比較不同樣品間目的報(bào)告基因的激活程度。如果以螢火蟲螢光素酶為內(nèi)參，也可以進(jìn)行類似計(jì)算。 | ||||||||||||||||||||||||
| 儲存/保存方法 | -20℃保存。C 組分建議預(yù)先使用無菌水配置為 2 mg/mL 儲液，B 組分、D 組分及配置為儲液的 C 組分， 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行小批量分裝。所有檢測工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍融。 | ||||||||||||||||||||||||
| 注意事項(xiàng) | 1、使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 | ||||||||||||||||||||||||
| 基本信息 | |||||||||||||||||||||||||
| 別名 | 熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖
通過檢測報(bào)告基因螢光素酶靈敏度，Absin明顯優(yōu)于國外
結(jié)論:Absin與進(jìn)口及國產(chǎn)T*品牌產(chǎn)品相比，螢光值最高，F(xiàn)/R比值與進(jìn)口P*品牌相近
溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究
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