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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>行業專用試劑>生物試劑>abs9727 AO/PI雙染試劑盒

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abs9727 AO/PI雙染試劑盒

參考價240.00
具體成交價以合同協議為準
規格
100T240.00元999 盒可售

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愛必信(上海)生物科技有限公司是一家從事生物學試劑及耗材的高新技術企業。公司秉承“為生命科學創造便利!為客戶創造價值!為員工創造幸福人生!”的發展理念,擁有專業的產品研發質檢團隊、市場營銷團隊及*倉儲物流等管理團隊。榮獲2021年度上海市“專精特新”企業稱號。

自營品牌Absin®,主要經營產品有:生化試劑(常用生化試劑、生物學實驗常用試劑、熒光染料、激動劑/抑制劑,植物提取物)、細胞生物學(細胞培養產品、血清、基質膠、添加劑、檢測試劑盒)、免疫學產品、分子生物學產品、實驗室儀器/耗材、產品定制和檢測服務。

Absin還提供一些特色產品:霍亂毒素B亞單位(CTB)、 雞胚提取物(CEE)、 牛腦垂體提取物、 呼吸爆發試劑盒、 多色免疫組化試劑盒、 mRNA原料等在業界深受客戶喜歡。

Absin秉承踏實,務實,求精和不斷創新的精神為中國科學家提供優質產品,努力打造屬于中國自己的生物試劑品牌,為廣大科學家提供更全面更豐富更優質的產品。

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生化試劑,分子生物學試劑,血清,細胞培養試劑,化學試劑,免疫學試劑,耗材,儀器,定制服務

供貨周期 現貨 規格 100T
貨號 abs9727 應用領域 化工,生物產業,制藥/生物制藥
主要用途 流式細胞儀;激光共聚焦;熒光顯微鏡

描述:

AO/PI雙染試劑盒是采用 AO/PI 探針雙染細胞核的方法檢測凋亡細胞的狀態,是細胞凋亡形態學研究常用的染色方法。吖啶橙(Acridine Orange,AO)為一種具有細胞膜通透性的熒光染料,該染料能透過活細胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。它與細胞中 DNA 和 RNA 結合量存在差別,復合物可發出不同顏色的熒光,AO 與 dsDNA 結合時發出綠色熒光,而與 ssDNA 和 RNA 結合時發出紅色熒光。當與 DNA 結合時,它與熒光素在光譜上非常相似,激發最大值為 502nm,發射最大值為 525nm(綠色)。當它與 RNA 結合時,激發最大值移至 460nm(藍色),發射最大值移至 650nm(紅色)。


在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。Propidium Iodide 是一種 DNA 結合性染料,其激發和發射波長分別為 488nm 和 630nm,產生紅色熒光,但無膜通透性,不能透過活細胞膜,只能染死細胞。因此,在熒光顯微鏡下觀察,正常細胞不能著色,早期凋亡細胞呈微弱紅光,晚期凋亡細胞紅光加強,壞死細胞呈強紅色熒光。


應用:

流式細胞儀;激光共聚焦;熒光顯微鏡


使用方法:


1、試劑準備:
PBS 緩沖液(pH7.4)或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)


2、耗材準備
離心管、吸頭、一次性手套


3、染色工作液配制:
(1) 根據樣品數,按下列比例配制染色緩沖液。 取 100μL 試劑 C 用 900μL 純水稀釋,充分混勻即成染色緩沖液。
(2)每 500μL 染色緩沖液加入 5ul AO 染色液和 10ul PI 染色液,充分混勻,即成染色工作液。


4、懸浮細胞染色
(1)收集樣本細胞,細胞數量在 10X105 個以內。
(2)用 PBS 洗滌細胞兩次。
(3)用 500μL 染色工作液將細胞重懸。
(4)輕輕混勻后 4℃避光孵育 10-20 分鐘。
(5)用 PBS 洗滌細胞。
(6)用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測結果。


5、貼壁細胞原位染色
(1)用 PBS 洗滌細胞 2 次。
(2)細胞培養板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。
(3)37 ℃孵育細胞 10~20 分鐘,不同的細胞最佳培養時間不同。可以用 20 分鐘作為起始孵育時間,之后優 化體系以得到均一的標記結果。
(4)吸干染色工作液,用培養基洗培養板或蓋玻片 2~3 次,每次用預熱的培養基覆蓋所有細胞,然后吸干培養基。

結果分析 :
在熒光顯微鏡下,選用 488nm 激發光鏡檢:
AO 染色正常細胞 DNA 呈均勻黃色或黃綠色,形態結構正常。
當細胞凋亡時,染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一、致密濃染。
壞死細胞呈強紅色熒光。


注意事項:

1、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。
2、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
3、本染色試劑盒可用于細胞、細胞涂片等。以下以懸浮培養細胞的熒光顯微鏡檢測為例,其他方法請參閱相關資料。
4、貼壁細胞可以消化下來染色,也可以直接原位染色。




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