實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠糖化血紅蛋
白（GHb）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育
并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化
成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠糖化血紅蛋白（GHb）呈正相關。用酶標儀在450nm
波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
全血：用含有抗凝劑的無菌管收集，立即輕輕搖動，來回輕輕顛倒數次，使血液和抗凝劑混
勻，以防血液凝固。
注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1.
酶標儀（450nm）
2.
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱
96 孔配置
48 孔配置
備注
8
微孔酶標板
12 孔×8 條
12 孔×4 條
無
標準品
0.3mL*6 管
0.3mL*6 管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物 A
6mL
3mL
無
底物 B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2 張
2 張
無
說明書
1 份
1 份
無
自封袋
1 個
1 個
無
備注：
1.
標準品濃度依次為：400、200、100、50、25、12.5 ng/mL
2.
經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中
直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本
進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1.
嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室
溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2.
洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。
3.
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4.
底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5.
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6.
在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.
任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞
試劑盒中反應試劑的生物活性。
9.
不能使用過期產品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1.
從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
9
2.
設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
3.
樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。
4.
除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體
100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5.
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪
制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1.
檢測范圍：12.5 ng/mL – 400 ng/mL。
2.
靈敏度：檢測濃度小于 1.0 ng/mL。
3.
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.
重復性：板內變異系數小于 10% ，板間變異系數小于 15% 。
說明

小鼠糖化血紅蛋白（GHb）試劑盒（ELISA）

由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分
析，本產品可能存在一定的質量技術風險。
1.
最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請
務必準備充足的標本備份。
2.
不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據
試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。
3.
只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有
嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結果。
4.
本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使
用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
5.
使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致
10
ELISA 實驗結果偏差。
6.
若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時
間等，所以可能存在檢測不出的情況。
7.
某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測
抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。