結晶紫酶聯免疫反應測試盒

結晶紫ELISA試劑盒特點 ：

高回收率（80-95%)，快速地從魚蝦或者水樣中提取結晶紫試劑盒也可以檢測隱性結晶紫，檢測前先用提供的氧化液將隱性結晶紫轉變成有色結晶紫。96孔高通量定量檢測，魚或者蝦樣品的檢測下限為)0. 1PPB制備好的樣品，可以直接用于LC或者LC/MS確認，高重復性結晶紫酶聯免疫反應檢測試劑盒是利用競爭性的酶聯反應原理定量檢測分析結晶紫在魚、蝦以及魚池或者魚缸水樣中的含量。

結晶紫ELISA試劑盒原理：

實驗方法基于競爭性酶聯反應原理。徹孔板上包被有 cv的特異性抗體。測試分析時.樣品和 CV- HRP耦合物共同孵育。如果樣品中含有CV抗原，就會競爭抗體，從而陌止CV-HRP耦合物與抗體結合。加入HRF耦合物的底物在加入底物后將催化底物 顯 色 . 根 據 顏 色 反 應 的 靈 敏 度 來 確 定 樣 品 中C V的 濃 度 。 顏 色的深淺同樣品中藥物的濃度成反比矢系。

注意事項：

i>標準品中含有結晶紫，請小心使用。

2>不要使用過期的試劑盒。

3)不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。確保二抗及二抗稀釋液正確配制。

4>盡 M保持室溫20-25 V,避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發a在 孵 W 期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5>水質量很里要，確保使 m蒸餾或者去離子水。

6>加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7>孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8>從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質的風險。

9>將微孔板置于放有千燥劑的密封袋中，冷藏保存。

試劑盒組成：

已包被抗體的酶標板 （CRYSTAL VIOLET AB-COATED

PLATE)( 可拆式）

12x8 孑 L

標準液（ STANDARDS) (0 , 0.OS , 0.15 , O.S , 1.S , 4.S

NG/M L ) 6 x 1 .8 M L

回收用 100PPB (SPI Kl NG)( 可選）

1 x 〇 . 8 M L

CV-HRP 耦合物（ CV-HRP CONJUGATE)

1 x 8 M L

2 〇 x 濃縮洗液 （WASH SOLUTION)

1 x 28 M L

終止液 （STOP BUFFER)

1 x 20 M L

TMB 底 物 （TMB SUBSTRATE)

1 x 1 2 M L

提取物 A(CONCENTRATE OF SAMPLE EXTRACTION

BUFFER A)( 包括試劑 I 和 M) 20G

1 〇 x 提取液 B (SAMPLE EXTRACTION B)

檢測步驟

(1 )加入1 00 L的標準品或樣品于所設定的孔中；

(2 )在每孔中加入50 L CV- HRP耦合物，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

(3 )避光室溫（20 - 25 °C )溫育1小時；

(4 )洗板3次，每次加入250 L 1 x洗液，后_次盡量甩干并在吸水紙上吸干；

(5 )加入100 L的 TMB底物；

(6 )在室溫下避光培養20分鐘，加入100 L的終止液終止反應，在450 NM下讀0 D值（底物本身是無色的，顏色發生變化不能使用。孵育時適當覆蓋微孔板）。

試劑的準備

確定樣品正確儲存.通常，樣品應該在2-4° C下冷藏不得超過1 - 2天.如果需要長時間保存冷凍樣品低溫度-20 X.凍結的樣品在室溫（20-2 SaC / 68-77 ttF)下解凍或者在使用之前放在冰箱中保存。所有的試劑在使用之前應將其回溫至室溫，并在使用試劑前搖動幾下，以保證合理的濃度^

(1 ) 1倍氧化劑液

根據實際上需要，按9: 1用乙腈稀釋10 x氧化劑液（1〇 X OXIDANT SOLUTION)。

(2 ) 1倍提取液A

打幵提取液A固體濃縮袋（EXTRACTION BUFFER A CONCENTRATE ),取出試劑 I和丨丨，混和加入一容 fi瓶中•加入100 ML雙蒸水，攪拌至*溶解，可在室溫(2 0-2 S °C / 68-7 7*^)下*保存。（試劑具有腐蝕性，混合攪拌時候帶手套操作）

(3 ) 1倍提取液B

根據實際上需要，按9:1用蒸餾水稀釋1〇 X 提取液B。

(4 ) 1倍提取液C液

根據實際上需要，按9:1用蒸餾水稀釋1〇 X 提取液C

(1) 分別計箅標準和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值相對吸光度值（％) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值）*100

(2) 以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線

(3) 從標準曲線上讀取樣品的濃度值備注：如結果呈陽性反應，應該用其他檢驗方法（如色譜/質譜方法等）進行確證。