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使用方法：紅色端向上，黑色端浸入液體中，吸至黑色刻度線處即為對應容量

德之瑞M100薄層色譜中藥食品化工點樣刻度定量毛細管

點樣原理

    用毛細管自動吸液時，液體在管狀物體的內(nèi)側(cè)因為內(nèi)聚力以及附著力的差異，克服地心引力而向上升。當毛細管的一端（液面）接觸薄層板時破壞了這種力，毛細管內(nèi)的液體自動下降滲出到薄層板上。毛細管的一端（液面）只要不接觸到薄層板，就不會流出。

點樣方法

點樣除另有規(guī)定外，可直接手持毛細管的一端，點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。點樣直徑不超過5mm，點樣距離一般為1~1.5cm即可。樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將呈空心環(huán)——環(huán)形色譜效應。因此配制樣品溶液時應選擇對組分溶解度相對較小的溶劑。點樣方式有點狀點樣和帶狀點樣。

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怎樣提高點樣效率

點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超1聲bo或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、**。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1--2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm。

德之瑞M100

點樣方式、點樣量及點樣設備的選擇

    對樣品的洗脫能力不同，因此在點樣的同時，樣品在原點開始呈環(huán)形展開，如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環(huán)，Kaiser稱這種現(xiàn)象為“點樣環(huán)形色譜效應”。這種效應對隨后的線形展開造成不良影響，因此配制樣品溶液時應選用對組分溶解度相對較小的溶劑；溶劑的粘度不宜過高，以便于點樣，溶劑的沸點要適中，沸點過低由于揮發(fā)會改變樣品溶液濃度導致較大誤差，沸點過高，樣品溶液的溶劑會在原點殘留，導致改變展開劑的選擇性，特別是樣品溶液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更為明顯，zui常用的溶劑為甲醇及乙醇，有時也用丙酮。點樣后必須將溶劑全部除去后再進行展開，但要避免高溫加熱，以免改變待測成分的性質(zhì)。

    點樣方式、點樣量及點樣設備的選擇決定于分析的目的、樣品溶液的濃度及被測物質(zhì)的檢出靈敏度。

    點樣體積經(jīng)典薄層一般為1-5μl，高效薄層為100-500nl，樣品溶液濃度一般在0.01%-1.00%范圍內(nèi)，點樣過多會造成原點“超載”，展開劑產(chǎn)生“繞行”現(xiàn)象使斑點拖尾或重疊，使掃描峰形不對稱或不能基線分離，并由于超載得到非線性的校正曲線，嚴重影響定量結(jié)果，降低準確度。

    經(jīng)典薄層的原點直徑zui大不得超過5mm，一般3mm較為合適，高效薄層原點直徑約為1-2mm，盡可能避免多次點樣，原點直徑過大會降低分辨率及分離度。

    經(jīng)典薄層起始線距底邊約1.5cm，高效薄層為1cm，展距前者為10-15cm，后者為5-7cm，對于難分離的化合物用多元展開劑展開時，注意原點與展開劑的距離每次要保持*，否則由于色譜分離zui初行為的差異而導致分離失敗。

    點與點的間距經(jīng)典薄層為1-2cm，高效薄層為0.5cm，用具自動換行功能的薄層掃描儀時，斑點之間的距離必須十分精確，才能正確地掃描每行的色斑，得到好的測定結(jié)果

在點樣前，應將薄層板在日光及紫外光下檢查板面有無損壞或污染，選擇合格的薄層板后決定用點狀點樣還是用帶狀點樣。為此，有些廠家生產(chǎn)了系列點樣設備以供選用，這些設備只適用于硬板。下面是常用的點樣方式及設備。

（一）點狀點樣

    如果僅僅為了定性，用內(nèi)徑約0.5mm管口平整的毛細管或微量注射器將樣品溶液點在距薄層底邊約2cm處，點樣直徑不超過5mm，點間距約為1-1.5cm即可。

    為進行定量，借毛細作用吸樣的定容管有兩種，一是容積為1、2、3、4及5μl的定量毛細管（Microcaps），另一種是100及200nl的鉑銥合金定量毛細管（Nanopipette）；注射器式的可變體積的點樣器有50-230nl的毫微點樣器及0.5-2.3μl的微量點樣器（Micro-Applicator），用于需要調(diào)節(jié)體積及沒有毛細作用的鍵合相薄層的點樣。

    毛細管式的微量點樣器裝在手動的點樣裝置的磁性點樣頭上，點樣頭裝在彈簧上。按下此點樣頭，毛細管借恒定的壓力接觸薄層表面。點間距離由帶準確的#44 間隔的E字形缺刻裝置控制，手動點樣器，適用于普通或高效薄層板，點樣體積精確，樣品原點小，原點間隔定位準確；注射器式的毫微點樣器及微量點樣器由測微尺控制，也可與Nanomat型點樣裝置配合，以使點樣位置精確。

    電動的點樣裝置*適用于上述各種點樣器的配套使用，并且還可以自動控制點樣次數(shù)，點樣器在薄居上的停留時間，以及點樣器接觸薄層的速度。還可避免手持毛細管點樣時的用力不勻，由于靠機械控制接觸板面，壓力恒定。此外，還有可以用于環(huán)形展開及向心展開的薄層點樣裝置。

（二）帶狀點樣

    當樣品溶液體積大、濃度稀時，采用自動點樣設備進行帶狀點樣。定量分析的點樣范圍為1-99μl，制備型分離點樣范圍為5-490μl，作定量標準曲線時，可由同一標準溶液，自動點上不同體積的標準液，故快速簡便，利用內(nèi)裝的微處理器編序操作，簡單易行。使用時樣品溶液吸在微量注射器中，點樣器不接觸薄層，而是用氮氣將注射器針尖的溶液吹落在薄層上，薄層板在針頭下定速移動點成0-199mm的窄帶。帶狀點樣展開后的斑點不僅分辨率明顯高于點狀點樣，而且精密準確，為定量分析提供便利條件。

（三）自動點樣

    全自動點樣裝置結(jié)合了現(xiàn)代的電子及機械技術(shù)，能進行點狀或帶狀點樣，采用*計算機編程控制，靈活多用，點樣量為10nl-50μl，可隨意設定點樣規(guī)范，可應用于單向、雙向、環(huán)形或向心色譜展開，高度自動化的點樣使定量分析結(jié)果準確。點樣參數(shù)可與掃描儀的掃描分析軟件連用，令定量分析工作達到高度自動化。

（四）接觸點樣

    當樣品溶液粘度較大或點樣體積要超過100μl時，用毛細管點樣就有困難，F(xiàn)enimore設計的接觸點樣法適用于這類樣品的點樣，美國制造的Clarke Contact Spotter就是這種接觸點樣器。在帶有抽氣孔的凹形塊的上方覆蓋一片涂有疏水性物質(zhì)的聚氟化物薄膜（a），當減壓抽氣時薄膜凹陷（b），此時將樣品溶液點在凹槽處（c），然后用氮氣吹去大部分溶劑（d），再將濃縮后的樣品液滴與高效薄層板的吸附劑層接觸（e），此時樣品就定量地轉(zhuǎn)移到薄層上。

用管狀點樣器上樣的誤差來源是由于點樣時薄層表面的損傷，溶液“爬壁”效應使外壁樣品的沉積、樣品的記憶效應以及管中的微小氣泡等。

    點樣誤差的大小與樣品的溶解度，溶液的表面張力，溶劑的粘度、揮發(fā)性和極性、點樣所耗費的時間、薄層板的質(zhì)量（粒度、均勻度、薄層厚度、粘合劑的性質(zhì)）等有關(guān)。

實驗操作步驟：

1、吸附劑的選擇

薄層色譜的吸附劑zui常用的是氧化鋁和硅膠。

1）、硅膠：

“硅膠H”—不含粘合劑；

“硅膠G”—含煅石膏粘合劑；

其顆粒大小一般為260目以上。顆粒太大，展開劑移動速度快，分離效果不好；反之，顆粒太小，溶劑移動太慢，斑點不集中，效果也不理想。

化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強，因而R_f值較小。

酸和堿 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 鹵代物、醚 >烯 > 飽和烴

本實驗選擇的吸附劑為薄層色譜用硅膠G。

2、薄層板的制備（濕板的制備）

薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果。薄層應盡量均勻且厚度要固定。否則，在展開時前沿不齊，色譜結(jié)果也不易重復。在燒杯中放入2g硅膠G，加入5—6ml  0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液，調(diào)成糊狀。將配制好的漿料傾注到清潔干燥的載玻片上，拿在手中輕輕的左右搖晃，使其表面均勻平滑，在室溫下晾干后進行活化。本實驗用此法制備薄層板4片。

3、薄層板的活化

將涂布好的薄層板置于室溫涼干后，放在烘箱內(nèi)加熱活化，活化條件根據(jù)需要而定。硅膠板一般在烘箱中漸漸升溫，維持105—110℃活化30min。氧化鋁板在200℃烘4h可得到活性為Ⅱ級的薄板，在150—160℃烘4h可得活性為Ⅲ—Ⅳ級的薄板。活化后的薄層板放在干燥器內(nèi)保存待用。

4、點樣

先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細管吸取樣品，在起始線上小心點樣，斑點直徑一般不超過2mm。若因樣品溶液太稀，可重復點樣，但應待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣，以防樣點過大，造成拖尾、擴散等現(xiàn)象，而影響分離效果。若在同一板上點幾個樣，樣點間距離應為1。點樣要輕，不可刺破薄層。

5、展開

薄層色譜的展開，需要在密閉容器中進行。為使溶劑蒸氣迅速達到平衡，可在展開槽內(nèi)襯一濾紙。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其高度不超過1cm。將點好的薄層板小心放入層析缸中，點樣一端朝下，浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時取出，盡快在板上標上展開劑前沿位置。晾干，觀察斑點位置，計算Rf值。

6、顯色

被分離物質(zhì)如果是有色組分，展開后薄層色譜板上即呈現(xiàn)出有色斑點。

如果化合物本身無色，則可用碘蒸氣熏的方法顯色。還可使用腐蝕性的顯色劑如濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸等。

對于含有熒光劑的薄層板在紫外光下觀察，展開后的有機化合物在亮的熒光背景上呈暗色斑點。

本實驗樣品本身具有顏色，不必在熒光燈下觀察。