培養(yǎng)條件

• 培養(yǎng)基：DMEM/F12+1%N2+2%B27
• 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%
• 溫度：37攝氏度

細(xì)胞描述

細(xì)胞描述：本公司培養(yǎng)出品的神經(jīng)干細(xì)胞（NPC）取自12天C57小鼠胚胎的端腦，用DMEM/F12+1%N2+2%B27*培養(yǎng)基進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代。
細(xì)胞生長：神經(jīng)干細(xì)胞懸浮成“神經(jīng)球”生長。
細(xì)胞規(guī)格：1ml 凍存管 （1x10⁶）或者 1個25cm2的培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞活力：＞90%
細(xì)胞代數(shù)：P2~P3
細(xì)胞檢測：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
細(xì)胞傳代
1. 顯微鏡下觀察細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞懸浮成“神經(jīng)球”生長，通常情況下，每兩天換液一次，每四天傳代一次。
2. 在生物安全柜或者超凈臺中，將培養(yǎng)瓶中的含有神經(jīng)球的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到15ml離心管中。
3. 500rpm離心5分鐘，收集神經(jīng)干細(xì)胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超凈工作臺中輕輕吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是縮小神經(jīng)球的體積，不要消化能單個神經(jīng)干細(xì)胞，那樣會影響其生長速度。
5. 然后加入5ml培養(yǎng)基，吹打均勻后1000rpm 離心5分鐘。
6. 離心后，去掉上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:2-1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞復(fù)蘇
1. 取出凍存管后，投入37℃水浴中，震蕩解凍2 min。
2. 酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入5 ml 37℃預(yù)熱的DMEM/F12+10%FBS培養(yǎng)基。
3. 將離心管離心（1000rpm，5 min）。
4. 棄去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27*培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存：液氮凍存（凍存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
細(xì)胞運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸（凍存管）/ 常溫運(yùn)輸（T-25培養(yǎng)瓶）
細(xì)胞鑒定：神經(jīng)干細(xì)胞采用nestin免疫熒光染色鑒定。

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