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常用的蛋白質SUMO化檢測方法檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhìSUMO化是一個重要的翻譯后修飾過程,涉及小型泛素樣修飾蛋白(SUMO)與目標dànbáizhì的共價結合。SUMO化對許多生物過程,如核輸運、轉錄調控、細胞周期進程和應激反應等都有重要作用。以下是常用的檢測dànbáizhìSUMO化的方法:
1.Western Blot:
使用特異性的抗SUMO抗體,可以直接檢測dànbáizhì是否經過SUMO化修飾。SUMO化通常會導致蛋白分子量的增加,這在電泳分離后可以觀察到。
2.免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP) + Western Blot:
首先利用特異性抗體將目標蛋白從細胞裂解液中沉淀下來,然后進行Western Blot使用抗SUMO抗體檢測其SUMO化狀態。
3.親和純化后的質譜分析:
通過SUMO結合位點的親和純化,可以將SUMO化的dànbáizhì從復雜的樣品中富集,然后使用質譜法進行鑒定。
4.生物發光共振能量轉移 (BRET):
在細胞內檢測SUMO化的動態過程。通常涉及將熒光蛋白和螢光蛋白標簽分別連接到目標蛋白和SUMO上,然后通過測量兩者之間的能量轉移來檢測它們的互作。
5.共焦熒光顯微鏡:
使用熒光標記的SUMO和目標蛋白,可以在細胞內直接觀察SUMO化修飾的位置和動態。
6.酶聯免疫吸附實驗 (ELISA):
使用特異性的抗SUMO抗體,可以進行SUMO化蛋白的定量分析。
圖1
常用的蛋白質SUMO化檢測方法檢測技術服務詳情介紹
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