多肽測(cè)序原理檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

多肽測(cè)序是指確定多肽或dànbáizhì分子中氨基酸殘基的順序的過(guò)程。這一過(guò)程對(duì)于dànbáizhì結(jié)構(gòu)和功能的研究至關(guān)重要，因?yàn)榘被嵝蛄兄苯記Q定了dànbáizhì的三維結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能。多肽測(cè)序主要依賴(lài)于質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）技術(shù)，尤其是串聯(lián)質(zhì)譜（Tandem Mass Spectrometry, MS/MS）技術(shù)。

圖1. 通過(guò)質(zhì)譜法進(jìn)行肽從頭測(cè)序的過(guò)程

質(zhì)譜測(cè)序原理

• 多肽的離子化

在質(zhì)譜分析中，首先需要將多肽樣品離子化。離子化是將多肽分子轉(zhuǎn)換為帶電粒子的過(guò)程，這一步驟對(duì)于后續(xù)的質(zhì)譜檢測(cè)至關(guān)重要。常用的離子化方法包括電噴霧離子化（Electrospray Ionization, ESI）和基質(zhì)輔助激光解吸/電離（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization, MALDI）。

• 離子的分離

離子化后的多肽離子會(huì)被送入質(zhì)譜儀中，通過(guò)質(zhì)量分析器進(jìn)行分離。質(zhì)量分析器根據(jù)離子的質(zhì)荷比（m/z）對(duì)它們進(jìn)行分離。常見(jiàn)的質(zhì)量分析器有時(shí)間飛行（Time-of-Flight, TOF）、離子阱（Ion Trap）和傅里葉變換離子回旋共振（Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance, FT-ICR）等。

• 多肽的碎片化

在MS/MS分析中，選定的前體離子（即特定m/z比的多肽離子）會(huì)被進(jìn)一步碎片化。碎片化是指在控制條件下使多肽離子斷裂，產(chǎn)生一系列代表多肽序列信息的小片段離子。常用的碎片化技術(shù)包括碰撞誘導(dǎo)解離（Collision-Induced Dissociation, CID）、電子轉(zhuǎn)移解離（Electron Transfer Dissociation, ETD）和光子誘導(dǎo)解離（Photon-Induced Dissociation, PID）等。

• 碎片離子的檢測(cè)

碎片化產(chǎn)生的離子片段隨后會(huì)被送入第二個(gè)質(zhì)量分析器中進(jìn)行檢測(cè)和分析。通過(guò)分析這些碎片離子的m/z值，可以獲得有關(guān)多肽氨基酸序列的信息。

• 序列分析和鑒定

zuì后，利用生物信息學(xué)軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)匹配技術(shù)，根據(jù)碎片離子的質(zhì)荷比和模式，推斷出原始多肽的氨基酸序列。這一步通常涉及到與已知dànbáizhì數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，以鑒定未知多肽或dànbáizhì的序列。

多肽測(cè)序的準(zhǔn)確性和成功率受多種因素影響，包括樣品的純度、離子化效率、碎片化方法以及質(zhì)譜儀的分辨率和準(zhǔn)確性。隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展和優(yōu)化，多肽測(cè)序已成為dànbáizhì組學(xué)和生物分子研究中bùkěhuòquē的工具

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