羅氏 LightCycler® 480 II 實時熒光定量PCR儀簡介

一、概述

實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-time Quantitative PCR, qPCR）技術作為現(xiàn)代分子生物學中常用的核酸分析方法，因其靈敏度高、特異性強、動態(tài)范圍寬等優(yōu)勢，廣泛應用于生命科學研究、疾病診斷、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等領域。羅氏公司推出的 LightCycler® 480 II 是基于 qPCR 技術的一款中高通量實時熒光定量PCR系統(tǒng)，適用于多種研究和應用場景，支持多種熒光染料與探針類型的檢測方案。

二、系統(tǒng)構成與技術規(guī)格

1. 儀器結構

LightCycler® 480 II 系統(tǒng)由以下幾部分組成：

• 光學模塊：采用多通道熒光檢測系統(tǒng)，支持多色熒光信號同時采集，適用于復雜多重實驗設計。

• 熱循環(huán)模塊：基于精密控溫技術，實現(xiàn)快速升降溫及溫度均一性，確保擴增反應的穩(wěn)定性和重復性。

• 軟件控制系統(tǒng)：配備 LightCycler® 軟件，可進行實時數(shù)據(jù)采集、曲線分析、定量計算、熔解曲線繪制等功能。

• 樣本支持單元：兼容 96 孔與 384 孔反應板，滿足不同通量實驗需求。

2. 技術參數(shù)（以廠家技術手冊為準）

三、核心功能與應用范圍

1. 多重熒光檢測

LightCycler® 480 II 可支持多達六種熒光通道的同步檢測，為開展多重PCR實驗提供技術支持。通過多通道配置，可在一個反應中同時檢測多個靶標，有助于節(jié)省樣品、時間和成本，廣泛用于病原體多重檢測、基因多態(tài)性分析等實驗中。

2. 高通量反應能力

該儀器支持兩種反應板規(guī)格（96 孔與 384 孔），便于在樣本量較大或需要進行高重復性實驗時保持效率，適用于大型實驗室、臨床研究平臺以及高通量篩選任務。

3. 靈活的軟件分析平臺

LightCycler® 軟件不僅可實時呈現(xiàn)熒光信號變化，還具備擴增曲線繪制、Ct 值判定、標準曲線建立、基因表達分析、HRM（高分辨率熔解）分析等模塊，方便用戶根據(jù)實驗目的開展不同類型的數(shù)據(jù)處理與可視化分析。

4. 熔解曲線與HRM分析

系統(tǒng)支持高分辨率熔解曲線分析（High Resolution Melting, HRM），可對堿基變異、基因突變及甲基化狀態(tài)等微小差異進行精細識別，適合遺傳學研究與分子診斷中敏感位點的檢測。

5. 自動化與擴展性

儀器可配合自動移液系統(tǒng)進行樣本裝載與反應準備，減少人工操作誤差。其模塊化設計便于與實驗室信息管理系統(tǒng)（LIMS）對接，也可根據(jù)不同研究階段升級軟件與硬件組件。

四、典型應用場景

1. 醫(yī)學檢驗與分子診斷

在病毒核酸檢測、遺傳病篩查、腫瘤基因突變分析中，LightCycler® 480 II 提供穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)支持。其靈敏的檢測性能使其能夠識別低豐度靶標，在早期診斷與病原體快速識別中具有實用價值。

2. 藥物開發(fā)與藥效評價

通過定量PCR技術監(jiān)測基因表達水平，可用于藥物作用機制研究、療效評價及毒理學分析。在靶向治療和個性化醫(yī)療方案開發(fā)中，qPCR 是關鍵技術之一。

3. 食品安全與轉(zhuǎn)基因檢測

該儀器廣泛用于轉(zhuǎn)基因作物的篩查、動物源性成分鑒定及致病微生物檢測，特別適合需要高通量篩查的食品安全實驗室。

4. 基因表達分析與分子生物研究

qPCR是研究基因調(diào)控網(wǎng)絡與信號通路的常規(guī)手段，LightCycler® 480 II 在表達量分析、微量RNA研究、內(nèi)參校正等方面提供可靠的實驗基礎。

五、使用注意事項與維護建議

1. 樣本處理規(guī)范

在實驗前應確保核酸提取純凈、無抑制劑殘留。反應體系應按推薦體積添加，避免氣泡影響熒光檢測結果。

2. 溫控與校準

建議定期對儀器進行溫度校準與通道檢測，確保反應一致性和通量準確性。系統(tǒng)提供內(nèi)部校準功能，便于用戶維護。

3. 軟件升級與數(shù)據(jù)管理

實驗室可根據(jù)使用需求定期更新控制軟件與分析插件，增強數(shù)據(jù)分析能力。建議使用自動備份功能保障實驗數(shù)據(jù)安全。

4. 清潔與保養(yǎng)

光學模塊應避免接觸污染物，實驗結束后及時清潔反應板托盤。長期使用后建議由技術人員進行深度維護與通道檢測。

六、結語

作為一款實時熒光定量PCR平臺，LightCycler® 480 II 在準確性、通量能力、通道靈活性和軟件分析深度等方面表現(xiàn)出穩(wěn)定的技術性能。無論是在基礎研究、分子檢測，還是大規(guī)模基因表達分析中，該設備都提供了廣泛的支持。隨著qPCR技術的不斷發(fā)展，LightCycler® 480 II 的應用也將持續(xù)拓展，成為眾多分子生物研究和臨床工作中的可靠工具之一。