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FITC-Phalloidin是一種熒光標記的鬼筆環肽(Phalloidin)試劑

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    2025年03月26日
關鍵詞
FITC-Phalloidin
上傳者
陜西新研博美生物科技有限公司
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資料簡介

理論分析:

英文名:FITC-Phalloidin 

分子式:C56H60N10O15S2 

分子量:1177.26  

產品詳情:

規格:10mg、25mg、50mg 等

貨期:根據具體的產品而定

純度:95%+

用途:實驗用途,科學研發,可定制服務

儲存條件:干燥、避光,短期(數天至數周)在 0 - 4 C 或長期(數月至數年)-20 C。

注意事項:所有的試劑不可用于臨床,不可用于食用,人體。

產品應用:

FITC-Phalloidin 是一種熒光標記的鬼筆環肽(Phalloidin)試劑,常用于細胞生物學和組織學研究中,用于特異性標記和檢測細胞內的肌動蛋白絲(F-actin)。 

鬼筆環肽(Phalloidin)是一種從毒蘑菇中提取的環狀七肽毒素,具有親和力和特異性,能夠選擇性地結合肌動蛋白絲(F-actin),而不會與單體肌動蛋白(G-actin)結合。FITC(Fluorescein Isothiocyanate)是一種綠色熒光染料,通過化學鍵與鬼筆環肽結合后,可以用于熒光顯微鏡觀察。

細胞和組織染色:FITC-Phalloidin 可用于固定和透化的細胞或組織切片的熒光染色,用于觀察細胞骨架結構。

細胞形態學研究:通過標記 F-actin,可以研究細胞的形態變化、細胞遷移和細胞分裂等過程。

定量分析:可以用于定量分析細胞內 F-actin 的含量。

包裝:

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使用方法:

一、工作液準備

1. 對于FITC標記鬼筆環肽(300T)

本品以溶于甲醇的20µM儲存液形式提供,總量為300µl。按照100 nM的工作液濃度來換算,可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產品后,根據單次使用量,對母液進行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩定。

開始實驗前,使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為:80~200nM。工作液現配現用。

2. 對于FITC標記鬼筆環肽(1mg

本品以凍干粉形式提供,分子量為1177.3,總量為1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的儲存液。如,加入8.494ml甲醇到1mg鬼筆環肽即得到100µM等量的儲存液,根據單次使用量,進行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩定。

開始實驗前,使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為:80~200nM。工作液現配現用。

二、染色步驟

1. 細胞爬片生長24h,使其密度達到50%匯合度。

2. 吸掉培養液,37℃預熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細胞2次。

3. 使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定,室溫固定10min。

※ 注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4. 室溫條件下,用PBS清洗細胞2~3次,每次10min。

5. 室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。

6. 室溫條件下,用PBS清洗細胞2~3次,每次10min。

7. 取200µl配制好的 FITC標記鬼筆環肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細胞,室溫避光孵育30min(通常情況下,4℃~37℃孵育皆可)。

注意:為了降低背景,可于FITC標記的鬼筆環肽工作液內加入1% BSA;另外,孵育過程中為了避免溶液揮發,可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。

8. 用PBS清洗蓋玻片3次,每次5min。

9. 使用200µl DAPI溶液(濃度:100 nM)對細胞核進行復染,約30s。

10. 用PBS清洗蓋玻片,然后倒置在已經滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑,然后用指甲油封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存,通常6個月內可繼續做F-actin染色分析。

※ 注意:也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑,合并步驟9)10),簡化步驟。

11. 熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,選擇FITC激發/發射濾片(Ex/Em=496/516nm)和DAPI激發/發射濾片(Ex/Em=364/454nm)。

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