大豆凝集素（SBA）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                  96T
50ng/L -850 ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中大豆凝集素（SBA）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大豆凝集素（SBA）水平。用純化的大豆凝集素
（SBA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大豆凝集素（SBA），
再與HRP標(biāo)記的大豆凝集素（SBA）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的大豆凝集素（SBA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定
吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大豆凝集素（SBA）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（1600ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
大豆凝集素（SBA）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
800ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50ng/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
大豆凝集素（SBA）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月Plant        SBA
FOR RESEARCH USE ONLY
Assay range：50ng/L -850 ng/L                               96 determinations
Purpose
For the quantitative in vitro determination of SBA concentrations in Plant tissue ,cell
and other samples.
Principle of the assay
The  kit assay SBA level  in  the  sample，use Purified SBA antibody  to  coat microtiter
plate wells, make solid-phase antibody, then add SBA to wells, Combined SBA antibody which
With  HRP  labeled，become  antibody  -  antigen  -  enzyme-antibody  complex,  after  washing
Compley, Add  TMB  substrate  solution,TMB  substrate  becomes  blue  color  At  HRP
enzyme-catalyzed, reaction  is  terminated by  the addition of a sulphuric acid solution and  the
color  change  is  measured  spectrophotometrically  at  a  wavelength  of  450  nm.  The
concentration of SBA in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples
to the standard curve.
Materials provided with the kit
1 wash    solution 20ml× 1bottle 7 Stopp Solution 6ml× 1 bottle
2 HRP-Conjugate reagent 6ml× 1 bottle 8
Standard
（1600ng/L） 0.5ml× 1 bottle
3 Microelisa stripplate 12well× 8strips 9 Standard diluent 1.5ml× 1bottle
4 Sample diluent 6ml× 1 bottle 10 Instruction 1
5 Chromogen Solution A 6ml× 1 bottle 11
Closure plate
membrane
2
6 Chromogen Solution B 6ml× 1 bottle 12 Sealed bags 1
Specimen requirements
1. extract as  soon  as  possible  after  Specimen  collection,and  according  to  the  relevant literature,  and  should  be  experiment  as  soon  as  possible  after  the  extraction.  If  it  can’t,
specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.
Assay procedure
1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:
800ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent
400ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent
200ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent
100ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent
50ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent
2.add  sample：Set  blank  wells  separay  （blank  comparison  wells  don’t  add  sample  and
HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample
dilution  40μl  to  testing  sample  well,  then  add  testing  sample  10μl  （sample  final  dilution  is
5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate  liquid: 30-fold （or 20-fold） wash solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled
water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer
to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except   blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B  to each well, evade  the
light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop  the  reaction：Add Stop  Solution50μl  to  each well,  Stop  the  reaction（the  blue  color
change to yellow color）.
11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and
within 15min.Steps description
Standard, Sample diluent
Add Standard, Sample diluent, incubate for 30 min at 37℃.
Wash 5 time,Add HRP-Conjugate reagent, incubate for 30 min at 37℃.
Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 30 min at 37℃.
Add Stopp Solution
Read absorbance at 450nm within 15 min
calculate
Calculate
Take  the  standard  density  as  the  horizontal,  the OD  value  for  the  vertical  ,draw  the
standard  curve on graph paper, Find out  the  corresponding  density according  to  the  sample
OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight  line
regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,
the result is the sample actual density.
Important notes
1. The kit  takes out  from  the  refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes  in
the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should
be stored in Sealed bag.
2. washing  buffer will Crystallization  separation,  it  can  be  heated  the  water  helps  dissolve
when dilute . Washing does not affect the result.
3. add  Sample  with  sampler  Each  step,  And  proofread  its  accuracy  frequently,  avoids  the
experimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend
to use Volley .
4. if the testing material content is excessively higher （The sample OD is bigger than the first
standard well ）,please dilute Sample （n-fold）, Please diluente and multiplied by the dilution
factor.（× n× 5）.
5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6. The substrate evade the light preservation.
7. Please  according  to  use  instruction  strictly,  The  test  result  determination must  take  the
microtiter plate reader as a standard.
8. All samples, washing buffer and each kind of  reject should according  to  infective material
process.
9. Do not mix reagents with those from other lots.
Storage and validity
1．Storage：    2-8℃.
2．validity：  six months小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體（GAD-Ab）ELISA試劑盒
小鼠雌二醇受體（ER）ELISA試劑盒
小鼠半乳糖6硫酸酯酶（Gal-6S）ELISA試劑盒
小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白（PTHrP）ELISA試劑盒
小鼠苯丙氨酸（LPA）ELISA試劑盒
小鼠抗心磷脂抗體IgA（ACA-IgA）ELISA試劑盒
小鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）ELISA試劑盒
小鼠抗心磷脂抗體IgG（ACA-IgG）ELISA試劑盒
小鼠apelin 12（AP12）ELISA試劑盒
小鼠α干擾素（IFN-α）ELISA試劑盒
小鼠丙酮酸激酶（PK）ELISA試劑盒
小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒
小鼠腫瘤標(biāo)志物（CA724）ELISA試劑盒
小鼠凝血因子Ⅱ（FⅡ）ELISA試劑盒
小鼠內(nèi)毒素（ET）ELISA試劑盒
小鼠心鈉肽（ANP）ELISA試劑盒
小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ（ PPAR-γ）ELISA試劑盒
小鼠毒性休克綜合征毒素1（TSST-1）ELISA試劑盒
小鼠環(huán)孢素A（CsA）ELISA試劑盒