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液相色譜測(cè)定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素

來(lái)源:天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司   2016年05月12日 09:37  

2010版藥典 黃曲霉毒素檢驗(yàn)法(文字版)

附錄 V 黃曲霉毒素測(cè)定法

    本法系用液相色譜法(附錄D)側(cè)定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素(以黃曲霉毒B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2總量計(jì)),除另有規(guī)定外,按下列方法測(cè)定。

     色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-(101842)為流動(dòng)相,流速每分鐘0.8ml;采用柱后衍生法檢測(cè)。衍生溶液為0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用誰(shuí)稀釋至1000ml制成),衍生化泵流速每掙鐘0.3ml衍生化溫度70;以熒光檢測(cè)器檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)λex=360nm(365nm),發(fā)射波長(zhǎng)λem=450nm。兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5

     混合對(duì)照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混和標(biāo)準(zhǔn)品(黃曲霉毒B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2標(biāo)示濃度分別為1.0ug/ml0.3ug/ml1.0ug/ml0.3ug/ml0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得。

     供試品溶液的制備 取供試品粉末約15g(過(guò)二號(hào)篩),精密稱(chēng)定,加氯化鈉3g,置于均質(zhì)瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘),離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45um)濾過(guò),量取續(xù)濾液20.0ml,通過(guò)免疫親和柱(AflaT-est@P),流速每分鐘3ml,用水20ml洗脫,洗脫液棄去,使空氣進(jìn)入柱子,將水?dāng)D出柱子,再用適量甲醇洗脫,收集洗脫液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀釋至刻度,搖勻。即得。

     測(cè)定法   分別精密吸取上述混和對(duì)照品溶液5ul10ul15ul20ul25ul,諸如 液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,另精密吸取上述供試品溶液20-25ul,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2的量,計(jì)算,即得。

     【附注】 1)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)有相應(yīng)的安全、防護(hù)措施,并不得污染環(huán)境。

2)殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿,應(yīng)置于貯存容器(裝有10%次氯酸鈉溶液)內(nèi),浸泡24小時(shí)以上,再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

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