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液相色譜測定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素

來源:天津市蘭博實驗儀器設備有限公司   2016年05月12日 09:37  

2010版藥典 黃曲霉毒素檢驗法(文字版)

附錄 V 黃曲霉毒素測定法

    本法系用液相色譜法(附錄D)側定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素(以黃曲霉毒B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2總量計),除另有規定外,按下列方法測定。

     色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-(101842)為流動相,流速每分鐘0.8ml;采用柱后衍生法檢測。衍生溶液為0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用誰稀釋至1000ml制成),衍生化泵流速每掙鐘0.3ml衍生化溫度70;以熒光檢測器檢測,激發波長λex=360nm(365nm),發射波長λem=450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應大于1.5

     混合對照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混和標準品(黃曲霉毒B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2標示濃度分別為1.0ug/ml0.3ug/ml1.0ug/ml0.3ug/ml0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為儲備液。精密量取儲備液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得。

     供試品溶液的制備 取供試品粉末約15g(過二號篩),精密稱定,加氯化鈉3g,置于均質瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000/分鐘),離心5分鐘(離心速度2500/分鐘),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45um)濾過,量取續濾液20.0ml,通過免疫親和柱(AflaT-est@P),流速每分鐘3ml,用水20ml洗脫,洗脫液棄去,使空氣進入柱子,將水擠出柱子,再用適量甲醇洗脫,收集洗脫液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀釋至刻度,搖勻。即得。

     測定法   分別精密吸取上述混和對照品溶液5ul10ul15ul20ul25ul,諸如 液相色譜儀,測定峰面積,以峰面積為縱坐標,進樣量為橫坐標,繪制標準曲線,另精密吸取上述供試品溶液20-25ul,注入液相色譜儀,測定峰面積,從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒索B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2的量,計算,即得。

     【附注】 1)本實驗應有相應的安全、防護措施,并不得污染環境。

2)殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿,應置于貯存容器(裝有10%次氯酸鈉溶液)內,浸泡24小時以上,再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

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