目的日常生活中,大面積深度燒傷、糖尿病、創傷等因素常造成正常皮膚結構完整性及生理功能的破壞。如何有效的修復創面、重建皮膚正常組織結構恢復皮膚正常生理功能,成為目前實驗研究以及臨床治療的難點。皮膚損傷的修復是一個非常復雜的過程,由多種生長因子及細胞因子介導,其中角質細胞生長因子(KGF)發揮了重要的作用。角質細胞生長因子為成纖維細胞生長因子家族的一員,它通過與受體(KGFR)結合發揮作用,是一種促上皮細胞增殖的生長因子,與創面愈合息息相關,還與免疫重建、器官發育、腫瘤發生等多方面關系密切。該因子由間質細胞分泌,其表達受IL-1、血小板衍生生長因子BB、轉化生長因子、腫瘤壞死因子等細胞因子的正調控作用影響,通過間充質一上皮相互作用方式,對多種組織器官,包括肺、皮膚、呼吸道、頭發毛囊、胃腸道、膀膚等的上皮損傷的修復發揮重要作用,但是KGF的生物學性質尚未*了解。本實驗旨在研究成纖維細胞產生的角質細胞生長因子(KGF)對表皮細胞增殖的影響。方法取16-30歲患者手術切除的包皮修剪至全厚皮片,外分離培養成纖維細胞和表皮細胞,取第二代的成纖維細胞提取總RNA采用逆轉錄一聚合酶鏈反應法(RT-PCR)檢測人皮膚成纖維細胞中KGF基因的轉錄水平,對第2代的成纖維細胞培養48 h后,收集細胞培養液用酶聯免疫吸附法((ELISA)檢測培養液中KGF的濃度,之后對第2代表皮細胞進行傳代,分別用K-SFM(不含KGF) } K-SFM(含1 ng/mL的KGF) } DMEM(含10%的FBS)和成纖維細胞培養液培養24h, 36h, 48h, 60h, 72h}用細胞計數法、MTT法和免疫熒光的方法檢測各實驗組培養液對表皮細胞增殖的促進作用。zui后對所得數據經行統計學處理。
結果RT-PCR結果顯示,可擴增獲得KGF,說明人皮膚成纖維細胞中KGF轉錄水平顯著,酶聯免疫吸附法((ELISA)可檢測到人皮膚成纖維細胞培養液中存在較高水平的KGF,細胞計數結果和MTT結果表明,添加KGF的K-SFM和成纖維細胞培養液均能夠促進表皮細胞增殖,亦可保持表皮細胞的活性,并用免疫熒光檢測方法得出,人皮膚成纖維細胞培養液中的KGF能夠與表皮細胞表面的KGF特異性受體相結合。結論本實驗得出體外分離培養的人皮膚成纖維細胞中KGF轉錄水平顯著,成纖維細胞培養液中較其他對照組能夠檢測到高濃度的KGF,且各組差異具有統計學意義(P <0.01)}說明成纖維細胞能夠合成和釋放KGF,且可與表皮細胞表面的KGF特異性受體相結合而發揮其特異性作用,成為其促進表皮細胞增殖的重要因素,從而促進創面修復的進程。
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