色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難分離物質對則可采用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
在選擇色譜柱規(guī)格時應考慮下列因素:
① 色譜柱內徑:樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對稱,要選擇色譜柱的內徑要適合于樣品的上樣量。
在選擇色譜柱規(guī)格時應考慮下列因素:
① 色譜柱內徑:樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對稱,要選擇色譜柱的內徑要適合于樣品的上樣量。
② 填料的粒徑:越小的粒徑具有越高的柱效,但是價格更高,并且?guī)砀叩闹鶋海笤O備的硬件具備更高的壓力耐受性。在被測組分的色譜峰與其它色譜峰非常靠近時,就需要更高的柱效,此時較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用。相反,越大的粒徑則柱效越低,但價格也相對較低,同時對設備的要求也不高。
③ 色譜柱長度:越長的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量,但是柱壓將會更高,同時分離時間可能會更長。
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