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構建穩定細胞株的兩種方法

來源:生物試劑銷售中心   2015年10月23日 13:44  
構建穩定的細胞株,通常有二種方法:一是脂質體轉染后,單克隆篩選穩定細胞株。二是應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩定細胞株。
脂質體轉染:在轉染24小時后,消化細胞并計數。將細胞種到96孔板,保證每個孔2-3個細胞,這樣才能得到單克隆。待細胞貼壁后,加入抗生素篩選。篩選時間和濃度視細胞而定。一般G418一個星期作用,嘌呤霉素2-3天。脂質體法篩單克隆時間較長,且效率低,大概只有1%。
病毒轉染:先要用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,再用病毒轉染目的細胞。包裝病毒視不同類型的病毒而定,一般要3-5天的時間。包裝好的病毒要測滴度,根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩定細胞株。病毒轉染得到穩定細胞株的效率高,只是步驟繁瑣。

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