構建穩定的細胞株,通常有二種方法:一是脂質體轉染后,單克隆篩選穩定細胞株。二是應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩定細胞株。
脂質體轉染:在轉染24小時后,消化細胞并計數。將細胞種到96孔板,保證每個孔2-3個細胞,這樣才能得到單克隆。待細胞貼壁后,加入抗生素篩選。篩選時間和濃度視細胞而定。一般G418一個星期作用,嘌呤霉素2-3天。脂質體法篩單克隆時間較長,且效率低,大概只有1%。
病毒轉染:先要用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,再用病毒轉染目的細胞。包裝病毒視不同類型的病毒而定,一般要3-5天的時間。包裝好的病毒要測滴度,根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩定細胞株。病毒轉染得到穩定細胞株的效率高,只是步驟繁瑣。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。